抗生素由于其稳定的药效被越来越多的使用到医疗事业、禽畜饲养当中，达到了快速高效治愈人类和动物的多种疾病，有效控制疫情传播的效果。但是不加控制使用抗生素也会给自然环境跟人类健康带来无法预计的反作用，严重威胁着人类生存。因此建立一种高效分离、绿色节能抗生素检测手段尤为迫切。小分子有机溶剂双水相萃取体系作为一种新型的分离体系，已经引起了研究学者们的日益关注，由于该分离技术操作简单，萃取条件温和，不会使物质失活变性，且小分子有机物成本低廉，易于实验放大，因此在生物、医药、环境、食品等领域得到了广泛的应用。已有的小分子有机物双水相体系萃取技术大多采用一元体系进行萃取，对于二元体系的研究十分少见。本课题根据双水相萃取技术的成相原理，在一元双水相体系的基础上，利用不同种类的小分子醇溶剂的特性及优点，构建新型的小分子醇二元双水相体系，并将其应用于环境中四环素类抗生素残留的分离/富集。为抗生素残留的分析、检测研究提供了新的实验依据。本课题基于传统双水相萃取理论的基础上建立：小分子醇/盐二元双水相体系，将四环素类抗生素盐酸土霉素作为目标抗生素，考察了影响因素对其分配行为的影响。通过盐酸土霉素分配行为的变化，确定体系组成物质的种类和比例、分相盐的种类和浓度、pH、温度等。在最佳实验条件下，建立正丁醇/乙醇/NaH2PO4二元双水相体系改变分相盐种类及浓度、pH、温度、静置时间，最终得到盐酸四环素的萃取率为94.6%，将该结果与一元小分子醇双水相体系萃取四环素类抗生素的研究结果比较发现萃取率较高。建立正丁醇/乙醇/(NH4)2SO4二元双水相体系，考察了半合成类四环素（盐酸多西环素）在该体系中的分配行为，改变影响因素分相盐种类及浓度、pH、温度、静置时间、抗生素加入量等，得到盐酸多西环素在最佳萃取条件下的萃取率为92.25%。通过实验研究得出小分子醇二元双水相体系具有：小分子醇类物质价格低廉、绿色污染小、可回收利用，不同种类的小分子醇可降低彼此缺点形成更加完善的整体；二元体系成相快、无乳化现象、分离效果好等优点。