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目的:血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）是构成血管壁的主要细胞类型之一,在维持血管正常生理功能方面发挥着关键作用。VSMC的异常增殖是动脉粥样硬化、高血压和血管动脉瘤等众多血管重构疾病的成因之一。环状RNA（circular RNA,circ RNA）具有共价闭合的环状结构,不易受到核酸外切酶的降解,比线性RNA更加稳定。circ RNA可被分泌到外泌体,是潜在的疾病诊断生物标志物。我们团队之前通过microarray在增殖型人主动脉平滑肌细胞（human aortic smooth muscle cell,HASMC）和静止型HASMC之间鉴定出许多差异表达的circ RNA（differentially-expressed circ RNA,DEcirc RNA）,hsacirc0001402是显著下调的DEcirc RNA之一。然而,hsacirc0001402对VSMC增殖的调控作用尚不清楚。本研究对hsacirc0001402调控VSMC增殖的机制和作为不稳定型心绞痛（unstable angina,UA）的血浆诊断生物标志物的潜能进行论证,以期为VSMC增殖性心血管疾病提供潜在的治疗靶点,为UA提供潜在的血浆诊断生物标志物。方法:1. hsacirc0001402的实时定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）验证通过qRT-PCR技术,检测hsacirc0001402在增殖型HASMC和静止型HASMC中的表达水平,并通过2-ΔΔCt法计算差异倍数。2. hsacirc0001402的生物信息学分析通过circ Bank、Circ Interactome和miRDB数据库预测hsacirc0001402海绵吸附的micro RNA（miRNA）。通过联合运用miRTar Base、Target Scan、miRWalk和RNAhybrid数据库,从3′-UTR和CDS靶向的角度,预测miRNA靶向的差异表达的m RNA（differentially-expressed m RNA,DEm RNA）。通过基因本体论（Gene Ontology,GO）和pathway分析,对与hsacirc0001402共表达的DEm RNA进行功能分析,以确定hsacirc0001402在VSMC调控中的潜在作用。3. hsacirc0001402相关载体的构建构建pcDNA3.1（+）Circ RNA Mini-402重组质粒。根据hsacirc0001402的序列设计引物,在引物的5′端引入Eco R I酶切位点,3′端引入Xba I酶切位点。提取HASMC的总RNA进行RT-PCR扩增,在琼脂糖凝胶电泳之后,对扩增产物进行胶回收纯化。产物经双酶切后,插入pcDNA3.1（+）Circ RNA Mini Vector表达载体中,转化后进行菌落PCR、双酶切鉴定和测序分析。构建报告基因的相关载体。化学合成含Xho I和Not I粘性末端的野生型和突变型序列,插入psi CHECKTM-2 Vector中,得到四种重组质粒（hsacirc0001402-WT、hsacirc0001402-MT、FKBPL-WT和FKBPL-MT）。鉴定方法同上。4. hsacirc0001402对VSMC增殖的调控作用将pcDNA3.1（+）Circ RNA Mini-402重组质粒转染进VSMC,通过qRT-PCR验证其过表达效率,通过细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）检测其对VSMC的细胞活力的影响,通过Western blot检测其相关蛋白的表达水平。5.hsa-miR-183-5p对VSMC增殖的调控作用将hsa-miR-183-5p mimics转染进VSMC,通过Western blot检测其相关蛋白的表达水平。6.UA患者血浆中hsacirc0001402的检测通过qRT-PCR,检测健康者和UA患者血浆中hsacirc0001402的表达水平,并通过2-ΔΔCt法计算差异倍数。结果:1.hsacirc0001402在增殖型HASMC中下调。2.通过生物信息学分析,预测出hsacirc0001402可能海绵吸附69种miRNA。从3′-UTR和CDS靶向的角度,对miRNA进行靶DEm RNA预测,并对这些靶DEm RNA进行GO和pathway分析。发现hsa-miR-183-5p可能靶向87种DEm RNA,并且GO和pathway分析表明hsa-miR-183-5p可能通过CD44（cluster of differentiation 44）和FKBPL（FK506 binding protein like）调控VSMC增殖。还发现hsa-miR-545-3p可能靶向157种DEm RNA,并且GO和pathway分析表明hsa-miR-545-3p可能通过LRP1（low-density lipoprotein receptor-related protein 1）调控VSMC增殖。3.成功构建hsacirc0001402的表达载体和相关的报告基因载体。4.pcDNA3.1（+）Circ RNA Mini-402重组质粒能够高效过表达hsacirc0001402。hsacirc0001402降低了VSMC的细胞活力。在VSMC中,hsacirc0001402增加了CD44、FKBPL、LRP1和p21（cyclin-dependent kinase inhibitor 1A）的表达水平,降低了PCNA（proliferating cell nuclear antigen）的表达水平。5. 在VSMC中,hsa-miR-183-5p降低了CD44、FKBPL和p21的表达水平,增加了PCNA的表达水平。6. hsacirc0001402在UA患者血浆中的表达水平显著下调。结论:1.hsacirc0001402在增殖型HASMC中表达下调,过表达hsacirc0001402能够抑制VSMC增殖。推测其机制是:hsacirc0001402作为ce RNA分子,海绵吸附hsa-miR-183-5p而上调CD44和FKBPL的表达、海绵吸附hsa-miR-545-3p而上调LRP1的表达。2.与健康者相比,hsacirc0001402在UA患者的血浆中显著下调。hsacirc0001402是UA潜在的血浆诊断生物标志物。