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研究背景与目的:肝癌是一种高侵袭性的恶性肿瘤,为全球第六大常见癌症,居世界癌症死亡原因第四位。尽管目前的治疗方法取得了一定进展,但肝癌的预后极差,复发率很高。越来越多的研究表明,miRNAs在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的增殖和转移中发挥重要的作用,但miR-300对HCC的影响仍不清楚,本文拟通过研究miR-300及靶基因对HCC细胞增殖和迁移的影响,探讨其相关分子机制,寻找治疗和改善肝癌患者预后的潜在靶点。研究方法:在本研究中我们以4株人肝癌细胞及正常肝细胞为研究对象,利用qRT-PCR观察5株细胞中miR-300表达情况,选取miR-300高表达株转染miR-300 inhibitor,miR-300低表达株转染miR-300 mimic。此外,我们分别通过MTT实验,克隆形成试验,创伤愈合实验,Transwell实验和流式细胞术检测miR-300对HCC生物学行为的影响。利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证。为进一步研究LEF-1是否介导miR-300的相关作用,我们将miR-300 mimic/inhibitor与LEF-1/LEF-1 shRNA2共转染后检测细胞生物学行为变化。此外,我们收集临床标本86例,通过检测组织中miR-300和LEF-1的表达水平,研究两者之间及与肝细胞癌患者预后的相关性。研究结果:1.qRT-PCR发现,HCC细胞中miR-300表达量低于正常肝细胞,其中Huh-7为miR-300相对低表达株,Hep3B为miR-300相对高表达株。2.在Huh-7中转染miR-300 mimic后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,凋亡率增高,并诱导G1/S期阻滞;在Hep3B中转染miR-300 inhibitor后,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,凋亡率减低,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多。3.经生物信息学软件预测并通过双荧光素酶等实验证实,LEF-1是miR-300的靶基因。4.构建LEF-1稳定过表达/干扰细胞株,发现LEF-1可促进细胞增殖,提高迁移和侵袭能力,抑制细胞凋亡,影响细胞周期进程。5.通过上调或下调miR-300,结合LEF-1的过表达或干扰,发现LEF-1过表达可在一定程度上减弱miR-300mimic对细胞增殖及迁移能力的抑制作用,而干扰LEF-1可部分抑制miR-300inhibitor所诱导的细胞增殖及迁移;与上述结果类似,过表达或干扰LEF-1可分别减弱miR-300 mimic或inhibitor对细胞凋亡和周期的影响。6.HCC组织中miR-300低表达和LEF-1高表达与HCC患者的不良预后相关。研究结论:miR-300抑制HCC细胞的增殖与转移,促进凋亡,诱导细胞周期阻滞;LEF-1是miR-300的直接靶基因,miR-300下调LEF-1的表达;LEF-1促进HCC细胞的增殖与转移,抑制凋亡,影响细胞周期;miR-300通过靶向调控LEF-1影响HCC的恶性生物学行为;miR-300低表达和LEF-1高表达与HCC患者的不良预后相关。