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柑橘是世界上最重要的水果之一,其面积和产量在所有水果种类中均居第一位,在人们日常生活中占有重要的地位。但是柑橘产业中还存在着很多问题,如病虫害及自然灾害危害严重,成熟期过于集中,品种结构不合理等。全世界大约有20%可耕土地及一半以上的水浇田受盐渍化影响,并且这种影响在日益加剧,我国也大约有5亿亩盐渍化土地。因为柑橘上存在章期长、多胚性和珠心胚现象、遗传的高度杂合及单性结实等特点,利用常规育种方法进行抗盐品种改良受到限制,影响了育种工作的进行。农杆菌介导的转基因方法的突破,以及各类植物抗逆相关基因的克隆,为柑橘抗逆基因工程奠定了基础。 本研究以优良柑橘甜橙品种的愈伤组织和上胚轴为外植体,利用根癌农杆菌介导法转化MdSPDS1和HAL2基因,期望能够获得抗盐的新种质。主要研究结果如下: 1 研究卡那霉素对朋娜脐橙和佛罗斯特脐橙胚性愈伤组织的影响。确定了在柑橘转化实验中,筛选抗性愈伤组织的适宜卡那霉素浓度为50mg/L。 2 对椪柑和锦橙的上胚轴再生体系进行了初步研究。结果表明:BA对上胚轴再生影响最大,当BA浓度为1.0mg/L时,再生频率最高;椪柑上胚轴水平和垂直放置时最适宜的再生培养基分别为:MT+1.0mg/L BA+0.5mg/L IAA和MT+1.0mg/LBA+1.0mg/L IAA;锦橙上胚轴水平放置时最适宜的再生培养基为:MT+1.0mg/LBA+0.5mg/L IAA。 3 对影响朋娜脐橙愈伤组织转化效率的有关因子进行了初步优化,实验表明:当侵染时间为15-20min、侵染浓度OD600值为0.8、共培养天数为3d时,转化效率最高。 4 MdSPDS1基因和HAL2基因转化朋娜脐橙获得抗性愈伤组织,经多次选择继代,生长正常,分别经nptⅡ和35S-MdSPDS1、nptⅡ和HAL2引物PCR扩增分析鉴定证实为转基因产物。 5 将得到的MdSPDS1基因转化朋娜脐橙的转基因系进行盐胁迫(100mM),结果表明转基因系愈伤的鲜重增殖比对照要高,电导率较对照要低,证实了转基因系的抗盐能力高于对照。 6 将得到的HAL2基因转化朋娜脐橙的转基因系进行盐胁迫(100mM),结果表明转基因系愈伤的鲜重增殖比对照要高,电导率较对照要低,证实了转基因系的抗盐能力高于对照。