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目的:采用高效液相色谱法测定几批番泻叶中番泻苷A、B的含量,以含量最高的一批番泻叶为原料,提取对照品番泻苷A、B,并以番泻豆荚为研究对象,建立番泻豆荚中番泻苷A、B含量测定的方法。以证实番泻豆荚中含有与番泻叶相同的泻下有效成分番泻苷A、B,并与叶中二者的含量做比较。 方法:首先通过对测定条件的优化,采用高效液相色谱法测定番泻叶中番泻苷A、B的含量,以二者含量之和为指标,选出含量最高的一批番泻叶做原料,考察影响提取的各种因素,确定番泻叶中二蒽酮化合物的提取工艺。此工艺为:番泻叶粗粉加入含0.1%碳酸氢钠的30%甲醇溶液采用超声提取方法提取,得提取溶液。提取液浓缩,调pH值5.0,上D101大孔吸附树脂柱,先以水洗,再以30%乙醇洗脱,收集洗脱液,低温浓缩至干,得提取物。进一步将提取液酸化,以正丁醇萃取,得总二蒽酮化合物,经过制备高效液相色谱技术分离纯化,得到对照品番泻苷A、B,其结构经UV、IR、MS等波谱分析,结合文献报道数据确定其结构,并与日本进口的番泻苷A以及中检所购买的番泻苷B作了对照品比对实验。在此基础上,建立番泻豆荚中番泻苷A、B的含量测定方法,采用高效液相色谱法,色谱条件为:采用ODS色谱柱,乙腈:醋酸-0.1mol/L醋酸钠缓冲液(pH5.0)(35:65),该混合溶液1000ml中,加入四庚基溴化铵2.45g为流动相,检测波长340nm,流速1.0ml/min。测定不同批号的六批番泻豆荚样品中番泻苷A、B的含量,以二者含量之和为指标,与番泻叶中二者的含量做比较。 结果:自制对照品番泻苷A、B与日本进口的番泻苷A以及中检所购买的番泻苷B的对照品比对实验结果显示,日本进口的番泻苷A纯度为99.697%,自制的番泻苷A纯度为99.510%;中检所购买的番泻苷B纯度为97.883%,自制的番泻苷A纯度为99.557%。本研究还建立了简便、快速的番泻豆荚中番泻苷A、B的含量测定方法。采用高效液相色谱法,测定了六批番泻豆荚中番泻苷A、B的含量,平均回收率:番泻苷A:97.72%,RSD=0.54%;番泻苷B:97.57%,RSD=0.69%。线性范围:番泻苷A:0.482~3.856μg,rA=0.99998;番泻苷B:1.036~8.288μg,rB=0.99996。以番泻苷A、B的含量之和为指标,六批番泻豆荚的含量(mg/g)分别为:26.4039、22.5996、23.6430、25.7697、25.5793、29.0349;而与番泻豆荚样品测定方法完全相同的四批番泻叶的含量(mg/g)为:15.2928、15.1983、13.2134、12.5825,明显低于番泻豆荚中二者的含量之和。 结论:本课题建立了从番泻叶中提取对照品番泻苷A、B的方法,并建立了采用HPLC法测定番泻豆荚中番泻苷A、B的含量的方法。目前,国内外文献中均未见采用HPLC法测定番泻豆荚中番泻苷A、B含量的报道。本课题研究填补了这一空白,首次采用HPLC法测定了番泻豆荚中番泻苷A、B含量,所建立的方法简便、快速、重现性好,证实了豆荚中含有与叶相同的泻下有效成分番泻苷A、B,且豆荚中二者的含量均高于叶。