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口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)引起的以感染偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病。该病的发生和流行严重危害畜牧业的健康持续发展,造成巨大的经济损失,该病被世界动物卫生组织列为必须申报的多种动物共患传染病之一。多项研究表明检测3ABC抗体是最可靠的衡量感染与免疫动物的指标。3ABC-ELISA敏感性和特异性最好,是大规模检疫动物,区分疫苗免疫和自然感染的最有效方法。然而,抗3A非结构蛋白的抗体存在于一些疫苗免疫的动物当中,影响3ABC检测的特异性。3A非结构蛋白是口蹄疫病毒最重要的非结构蛋白之一,免疫原性最强,能够刺激机体产生非结构蛋白抗体。因此在前人研究的基础上,对3A非结构蛋白抗原表位进行深入研究。为了鉴定Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白的B细胞线性表位,设计了15(A1~A15)个覆盖整个Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白的多肽片段,每一个多肽片段合成一对寡核酸片段,经磷酸化、退火后插入表达载体pET-32a(+)进行融合表达,经Western blot和ELISA分析表明A8和A11融合蛋白能够被Asia1型口蹄疫感染血清所识别,鉴定表明A8和A11为Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白的B细胞线性抗原表位区。为了进一步鉴定Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白的B细胞线性抗原表位,设计了13个覆盖A8和A11的多肽片段,分别进行融合表达,表达的13个融合蛋白经Western blot鉴定并将Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白的B细胞线性抗原表位精确定位于A8-3(V90NEYIDKA97)和A11-12-Z7(A109EKNPLE115)。在鉴定Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白的基础上,利用MEGA4序列分析软件,对226个不同型FMDV(A、O、C和Asia1)的3A非结构蛋白氨基酸序列进行比对,结果表明只有第95位Asp发生置换以外其他氨基酸基本保守。为了进一步验证A8-3 (V90NEYIDKA97),根据参考序列比对结果和氨基酸的结构类型、亲疏水性和极性构建表位突变体A8-3-E(VNEYIEKA)和A8-3-F(VNEYIFKA)。A8-3-E(VNEYIEKA)存在于大多数FMDV(A、O、C和Asia1)血清型中,而A8-3-F(VNEYIFKA)不存在于任何血清型中。基于以A8-3和A11-12-Z7为抗原建立间接ELISA方法,用于临床检测牛血清样品,能够区分出阴阳性。综合上述实验结果,对Asia1型口蹄疫病毒3A非结构蛋白的B细胞线性抗原表位精确定位、构建表位突变体和以表位A8-3和A11-12-Z7为抗原建立间接ELISA方法,能够用于检测感染牛血清,不仅可以了解口蹄疫病毒的抗原结构,还为进一步研究其功能及口蹄疫的诊断方法奠定基础。