短帚霉对甲板及毛发侵袭力的实验室研究和电镜观察

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目的:短帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)是一种腐生性条件致病真菌,是与甲真菌病相关的最常见霉菌之一。本试验一方面通过建立真菌透甲模型,探讨短帚霉对21~30岁年龄组健康甲板的侵袭能力,并通过测定透甲时间来比较短帚霉和须癣毛癣菌之间的差异,同时采用扫描电镜微观观察受侵甲板组织的变化情况,比较两种菌株对甲板的破坏程度。另一方面收集不同年龄组的毛发进行体外毛发穿孔试验,研究短帚霉对各年龄组间毛发破坏的程度有无差异,并通过在光镜和扫描电镜下观察毛发的微观结构变化比较短帚霉和须癣毛癣菌对毛发破坏的程度,为临床诊疗提供指导。方法:1.对甲板侵袭力研究:建立真菌透甲模型,将甲板分为短帚霉组和须癣毛癣菌组,将须癣毛癣菌组设定为阳性对照组,每组各设置一个空白对照模型(在蜡块模型中加入等量的生理盐水)和一个阳性对照模型(将等量的菌悬液直接加入培养基中),观察并记录每组的透甲时间,采用相关统计学方法比较两组的透甲时间是否存在差异性。在扫描电镜下观察每组受侵犯的甲板和空白对照甲板的背侧面及腹侧面的微观变化情况。2.对毛发侵袭力研究:收集四个年龄组的毛发(<2岁;2~13岁;14~18岁;>18岁)置于沙氏琼脂培养基中,将毛发分为短帚霉组和须癣毛癣菌组,须癣毛癣菌组为阳性对照组,向每个毛发标本上滴加3滴菌悬液,空白对照标本滴加等量的生理盐水,将培养基放置于27℃恒温箱中培养。滴加菌悬液后,每天取数根毛发在显微镜下观察有无穿孔情况,并记录各个标本发生毛发穿孔的时间。应用相关统计学方法比较同一年龄组不同菌种间及同一菌种不同年龄组间毛发穿孔时间有无差异;并取受损的毛发标本采用扫描电镜观察其微观结构变化。结果:透甲试验:短帚霉组的透甲时间为3(2.25,4.75)天,须癣毛癣菌组的透甲天数为5(4,6)天,短帚霉的透甲时间短于须癣毛癣菌,且存在统计学差异(P<0.05)。在扫描电镜下,短帚霉可使甲板角化细胞间出现较宽的裂隙,菌丝从中穿入;背侧面可观察到部分角化细胞边缘翘起,细胞间出现缝隙,菌丝从裂隙中穿出。而须癣毛癣菌损伤的甲板腹侧面角化细胞破坏较重,可观察到类似“蜂窝状”改变,细胞间裂隙增宽,有菌丝穿入其中;背侧面可见有菌丝从角化细胞间隙钻出,也可见到菌丝直接从角化细胞中穿出。改良毛发穿孔试验:短帚霉能使毛发边缘发生“毛刷样”改变,但直至试验结束,未观察到其使毛发产生楔形缺损。比较同一年龄组中短帚霉与须癣毛癣菌的毛发穿孔时间,四个年龄组均得出P(27)0.05,各个年龄组中短帚霉发生毛发穿孔的时间均长于须癣毛癣菌。而分别在短帚霉组和须癣毛癣菌组中,不同年龄组间毛发发生穿孔的时间均无差异。在光镜下,短帚霉组和须癣毛癣菌组均可破坏毛发,短帚霉组毛发破坏较轻,毛干边缘可见“毛刷样”改变,未见楔形缺损;须癣毛癣菌组毛发破坏较重,不仅可见“毛刷样”改变,还可见典型的楔形缺损。在扫描电镜下,短帚霉破坏后的毛发可观察到毛小皮边缘翘起、破碎,毛干皮质轻度受损。须癣毛癣菌破坏后的毛发损伤较重,毛发表面未见明显毛小皮样结构,毛干可见多个“虫蚀样”空洞。结论:1.在21~30岁年龄组中,短帚霉的透甲时间短于须癣毛癣菌。2.在不同年龄组间,短帚霉使毛发发生穿孔的时间均长于须癣毛癣菌。3.扫描电镜下,短帚霉对甲板及毛发的破坏程度较须癣毛癣菌轻。
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