山奈酚与白杨素抗肿瘤活性初探

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目的:  癌症是危害人类的最主要的疾病之一,化疗已成为手术切除病灶外治疗癌症的重要辅助疗法。山奈酚和白杨素均是黄酮类化合物,具有抗炎抗癌等作用。本实验研究山奈酚和白杨素对人鼻咽癌细胞株CNE-2和人肝癌细胞株Huh7的增殖抑制和诱导凋亡作用,探讨其抗肿瘤的作用机制,为黄酮类化合物的抗癌、防癌的开发应用提供依据。  方法:  1.人鼻咽癌细胞株CNE-2和肝癌细胞株Huh7,建立最佳培养条件;  2.CCK-8法检测细胞毒性,分别观察山奈酚、白杨素不同药物浓度、作用时间对CNE-2和Huh7细胞增殖抑制率的变化;  3.分别检测山奈酚、白杨素对CNE-2和Huh7细胞的凋亡作用,凋亡检测指标包括:  (1) Hochest染色检测细胞形态是否有凋亡小体;  (2)流式细胞仪Annexin V-FITC检测细胞凋亡率;  (3)流式细胞仪检测细胞周期的变化;  (4)酶标仪检测Caspase-3蛋白含量;  (5) ELISA法检测人1-磷酸鞘氨醇和神经酰胺。  结果:  1.与对照组相比,不同浓度的山奈酚、白杨素在不同作用时间均可抑制CNE-2和Huh7细胞的生长,并具有明显的剂量-时效关系,与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.05)。  2.CNE-2和Huh7细胞形态改变:荧光显微镜下,对照组细胞呈弥散而均匀的荧光;山奈酚组、白杨素组细胞则出现凋亡,表现为:荧光增强,胞核缩小碎裂,出现凋亡小体等。  3.CNE-2和Huh7细胞凋亡率的改变:山奈酚、白杨素作用24h、48h和72h后,随着时间的延长,细胞凋亡率与对照组相比明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。  4.CNE-2和Huh7细胞周期的改变:山奈酚和白杨素作用于鼻咽癌CNE-2细胞和肝癌Huh7细胞48h后,与对照组比较处于S期的细胞数目明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。  5.CNE-2和Huh7细胞的Caspase-3蛋白改变:山奈酚和白杨素作用于两种细胞48h后,与对照组相比,药物处理组的含量升高。  6.人1-磷酸鞘氨醇和人神经酰胺检测结果:CNE-2和Huh7细胞在山奈酚和白杨素作用24h和48h后,细胞培养上清中的1-磷酸鞘氨醇的含量降低,而神经酰胺含量升高(P<0.05)。  结论:  1.在CNE-2和Huh7两种细胞系中,山奈酚和白杨素均可抑制细胞的增殖,并具有明显的剂量-时间依赖性。  2.山奈酚和白杨素可诱导CNE-2和Huh7细胞的细胞凋亡率增加,细胞增殖减少,使处于S期的细胞数目明显减少,发挥抗癌作用。  3.山奈酚、白杨素可促进CNE-2和Huh7细胞中Caspase-3蛋白的含量增加,可能与细胞发生凋亡有关。  4.山奈酚和白杨素诱导细胞凋亡的作用可能与其降低细胞1-磷酸鞘氨醇含量、升高神经酰胺的水平有关。
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