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目的:探讨蛛网膜下腔注射Ro25-6981对切口痛大鼠镇痛及痛觉过敏作用的研究。
方法:雄性SD大鼠78只,采用完全随机设计分为13组,每组6只:对照组C组、切口痛I组、Ro25-6981R组(50.0μgR1组、100.0μgR2组、200.0μgR3组、400.0μgR4组、800.0μgR5组)、瑞芬太尼M组、Ro25-6981+瑞芬太尼R+M组(50.0μgR+M1组、100.0μgR+M2组、200.0μgR+M3组、400.0μgR+M4组、800.0μgR+M5组)。所有大鼠均在吸入七氟醚麻醉下进行L4~5节段鞘内注射5%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)溶液25μl和模型制备。I、R、M和R+M组在鞘内注射后行右后足切口痛模型制备。M组和R+M组切皮开始同时皮下泵注瑞芬太尼(0.04mg/kg,0.4ml),C、I、R组则泵注生理盐水0.4ml,泵注时间均为30min。所有大鼠均于术前24h、术后2h、6h、24h、48h检测痛行为学指标包括机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold, PWMT)和热缩足潜伏期(pawwithdrawal thermal latency, PWTL),同时测定鞘内给药前后大鼠的运动功能指标:斜板实验和BBB(basso, beattie and bresnahan)评分。根据痛行为学指标变化随机另取大鼠按上述方法分组,每组4只,于术后2h、6h在七氟烷麻醉下取标本:取新鲜L4~5节段右背侧半脊髓,待用Western blot检测脊髓水平NR2B酪氨酸磷酸化的表达量。
结果:1.痛行为学变化:各组大鼠术前PWMT和PWTL差异无显著性;对照组术前与术后PWMT和PWTL差异无统计学意义;I组、R1组、R2组、R3组、R4组、M组、R+M1组、R+M2组、R+M3组和R+M4组术后各时间点PWMT和PWTL与对照组和术前比较均出现不同程度降低(P<0.05);术后2hI组、R3组、R4组和R5组PWMT(7.1±0.9,9.0±0.8,12.2±1.4,14.4±1.0)g和PWTL(10.5±1.3,13.4±0.8,17.7±1.0,22.3±1.5)s逐渐升高,相互比较差异有统计学意义(P<0.05),M组、R+M3组、R+M4组和R+M5组PWMT(5.1±0.9,9.4±1.0,12.1±1.7,14.3±1.2)g和PWTL(6.3±0.7,13.1±0.8,18.0±0.8,22.3±1.5)s逐渐升高,相互比较差异有统计学意义(P<0.05);R5组和R+M5组PWMT(14.4±1.0,14.3±1.2)g和PWTL(22.3±1.5,22.3±1.5)s与对照组比较差异无统计学意义。术后6h、24h、48hR3组、R4组和R5组、R+M3组、R+M4组和R+M5组PWMT和PWTL与I组比较差异无统计学意义,且相互比较差异亦无统计学意义。术后各时间点I组、R1组、R2组、R3组、R4组、R5组、R+M3组和R+M4组R+M5组PWMT和PWTL与M组比较差异有统计学意义(P<0.05);术后各时间点R1组、R2组与I组PWMT和PWTL比较差异无统计学意义;术后各时间点R+M1组、R+M2组与M组PWMT和PWTL比较差异无统计学意义。2.运动功能变化:R5组和R+M5组大鼠在术后2h斜板实验(33.8±4.8,34.2±3.6)度和BBB(11.3±0.9,11.5±0.8)分与术前基础值和其余鞘内注射大鼠比较差异有统计学意义(P<0.05),术前及其余时间点各组大鼠运动功能无明显变化。3.Westernblot结果分析:与对照组比较,右后足跖肌切口I组术后增加了脊髓背角NR2B酪氨酸磷酸化的表达水平(P<0.05);而鞘内预先注射Ro25-6981200.0μg、400.0μg、800.0μg在术后2h与I组相比逐渐减少了脊髓背角NR2B酪氨酸磷酸化的表达水平(P<0.05);与对照组和切口痛组比较,术中输注瑞芬太尼术后可明显增加脊髓背角浅层NR2B酪氨酸磷酸化的表达(P<0.05);而预先给予Ro25-6981200.0μg、400.0μg、800.0μg可减少术后瑞芬太尼所引起的脊髓背角NR2B酪氨酸磷酸化的高水平表达(P<0.05)。
结论:1.蛛网膜下腔注射Ro25-6981对切口痛模型大鼠有镇痛作用,同时可以有效缓解瑞芬太尼诱发的切口痛大鼠术后痛觉过敏,其作用可能与抑制脊髓水平NR2B酪氨酸磷酸化有关。2.Ro25-6981对大鼠运动功能的影响随着注射剂量和药物代谢的变化而变化。