论文部分内容阅读
生长素(Ghrelin)是主要由胃粘膜分泌的一种脑肠肽,参与许多生理功能的调节,但Ghrelin对胃酸分泌的作用目前仍然存在争议。新生仔猪断奶前后胃酸分泌不足是导致腹泻的主要原因之一。Ghrelin是否参与断奶前后仔猪胃酸分泌功能发育的调节?调节途径如何?体外构建的Ghrelin重组表达质粒是否可在体内表达,并发挥生物学功能?为回答以上这些问题,本研究以断奶前后的仔猪为动物模型,通过体内和体外两方面来研究Ghrelin对断奶前后仔猪胃酸分泌的调节,并在此基础上,以断奶小鼠为动物模型,肌肉注射体外构建的重组表达质粒pcDNA3-Ghrelin,检测Ghrelin在肌肉中的表达和其对动物生长、胃生长和胃功能发育的影响,并探索相关机制。 1 断奶仔猪胃肠道Ghrelin表达与胃功能发育的关系一体内研究 本实验旨在揭示断奶前后仔猪胃肠道粘膜Ghrelin mRNA表达的时间和空间特异性,探讨其与胃功能发育之间的关系,并通过日粮添加半胱胺耗竭内源性生长抑素,观察伴随胃肠道功能的改变胃肠道粘膜Ghrelin mRNA表达的变化,从而分析Ghrelin在调节断奶前后仔猪胃肠道生长和功能发育中的作用。 实验选取新生仔猪18窝,随机分为试验组和对照组。自12日龄起,对照组饲喂基础乳猪料,试验组在基础日粮中添加120mg/kg半胱胺,以耗竭内源性生长抑素。试验组和对照组均于35日龄断奶。分别在28、35、38、42和45日龄时从每组中各选取6头猪屠宰,称量胃重和体重,并采取胃粘膜和小肠黏膜(包括十二指肠和空肠)。采用RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,定量分析胃底黏膜、十二指肠和空肠黏膜中Ghrelin mRNA的表达。结果显示:(1)仔猪胃的重量从28到45日龄呈逐渐升高趋势,38日龄以前胃的发育均较为缓慢,42日龄和45日龄期间胃的发育迅速增加,且此时胃的重量明显高于28、35和38日龄时胃的重量。胃的相对重量也呈逐渐升高趋势,45日龄时胃相对重量明显高于28和35日龄时胃相对重量;(2)胃底Ghrelin mRNA的表达丰度明显高于胃窦部;(3)仔猪胃底Ghrelin mRNA表达在28~42日龄期间较为稳定,然后在45日龄时Ghrelin mRNA