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本研究构建GalR2(galanin receptor 2,甘丙肽受体2)真核表达质粒pEGFP -GalR2,在转录及翻译水平鉴定了GalR2基因的表达,确定了GalR2基因表达产物的细胞内定位。同时建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型,并初步探讨了GalR2蛋白对小鼠抑郁症的影响。第一部分GalR2基因的获取、真核表达载体构建及细胞内表达鉴定和定位目的:获取GalR2基因全长编码序列,构建GalR2基因真核表达质粒,并在Hela细胞中表达,荧光显微镜观察其细胞内定位。方法:从C57BL?6J小鼠海马组织提取总RNA,以RT-PCR法调取GalR2基因编码序列,上下游引入EcoRⅠ、BamHⅠ酶切位点,克隆至pEGFP-C1,构建重组真核表达质粒pEGFP-GalR2,经PCR、酶切、测序鉴定正确后,脂质体转染至Hela细胞。RT-PCR,Western blotting分别在转录及翻译水平检测GalR2基因的表达,荧光显微镜观察融合蛋白细胞内定位。结果:从C57BL?6J小鼠海马组织扩增出大小为1116bp的GalR2基因片段。重组质粒经PCR、酶切鉴定和测序分析,表明构建正确。通过RT-PCR、Western blotting在转录及翻译水平鉴定了GalR2基因的表达。荧光显微镜观察GalR2融合EGFP(增强型绿色荧光蛋白)表达产物定位于细胞核内。结论:成功构建了GalR2基因与EGFP基因融合表达质粒pEGFP - GalR2,成功转染Hela细胞,在转录及翻译水平检测到GalR2基因表达,GalR2基因表达产物定位于细胞核内。第二部分建立小鼠抑郁症模型并初步探讨GalR2蛋白对小鼠抑郁症的影响目的:建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型,探讨GalR2蛋白对小鼠抑郁症的影响。方法:C57BL/6J小鼠经体重、敞箱实验、反抗抓获测试的初筛后,选取35只小鼠,根据随机数字表,将小鼠随机分为4组:Ⅰ.CUMS(chronic unpredictable mild stress,慢性不可预知轻度应激模型)组(10只小鼠);Ⅱ.CUMS+CORT(反复氢化可的松皮下注射模型)组(10只小鼠);Ⅲ.CORT组(10只小鼠);Ⅳ.正常对照组(5只小鼠)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠每天给予相应的刺激。每天观察小鼠体重和摄食量变化。28天后通过液体消耗实验、强迫游泳实验测定小鼠行为。选取Ⅰ、Ⅲ组建模成功小鼠7只,随机分为2组:pEGFP-GalR2组(每只小鼠侧脑室注射pEGFP-GalR2质粒8μl,4只小鼠);pEGFP-C1组(每只小鼠侧脑室注射pEGFP-C1质粒8μl,3只小鼠)。48小时后通过强迫游泳实验测定小鼠行为。结果:小鼠抑郁模型在第28天建立成功。抑郁小鼠体重增加量、摄食量、液体消耗实验中糖水消耗和糖水偏爱百分比均明显下降,纯水消耗显著提高。强迫游泳实验中挣扎时间和游泳时间缩短,不动时间延长。Ⅱ组小鼠短期内体重迅速下降并死亡。与Ⅰ组小鼠相比,Ⅲ组小鼠液体消耗和强迫游泳实验指标改变更明显。侧脑室注射术后,pEGFP-GalR2组小鼠存活3只,死亡1只;pEGFP-C1组小鼠存活2只,死亡1只。小鼠侧脑室注射前后及pEGFP-GalR2组与pEGFP-C1组行为学进行比较,未得到有统计学意义的结果。结论:成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。CUMS和CORT模型结合,小鼠不能耐受,短期内死亡。单独CORT模型造模效果要优于CUMS模型。GalR2蛋白对抑郁症的影响有待后续实验进一步探讨。