丙型肝炎病毒(HCV)的感染复制机理直到现在人们都还没有完全阐明清楚,其中最关键的原因就是缺乏体外复制体系和小动物模型。到目前为止,尚没有找到HCV感染的细胞受体[1]。另外HCV各个蛋白的结构与功能,与宿主细胞因子相互作用等研究仍有待进一步的深入。NS2作为HCV的一个非结构蛋白,其在HCV复制中的作用到现在都还不是很清楚。为了深入开展HCV NS2的结构与功能,论文首先在原核和真核细胞中表达了HCV NS2,并制备了相应的抗体(第2章),在此基础上,利用His-tag pull down获得了与截短NS2蛋白有可能相互作用的细胞因子(第3章),为揭示NS2蛋白在HCV中的复制作用奠定了基础。另外本文还研究薯蓣皂甙的抗病毒作用机制(第4章)。论文的第一章简要的概述了有关HCV,蛋白质相互作用研究技术及天然药物的抗病毒作用等方面的主要研究进展。第一节对HCV进行简单介绍,包括HCV的生活史、HCV的病毒粒子结构、HCV的基因组、HCV的发现。然后对HCV的各个蛋白的功能进行简单介绍,重点介绍目前为止人们发现的与HCV各个蛋白相互作用的细胞因子以及在HCV复制中的功能。第二节介绍蛋白质相互作用技术,首先介绍蛋白质组学产生的背景。然后介绍pull down技术和N端测序及肽指纹图谱,最后介绍酵母双杂交系统。第三节介绍天然抗病毒药物的研究,首先介绍目前发现的具有抗病毒作用的天然药物,然后介绍针对不同病毒的各种天然药物。最后着重介绍本文研究的薯蓣皂甙的一些特点,包括理化特性,已报道的抗病毒功能及其它生物学活性。第二章的内容是关于HCV ns2的原核及真核表达。因为NS2是一个跨膜蛋白,所以在原核中进行全长表达是很困难的。本实验截取位于膜外的C端的66氨基酸进行原核表达,通过亲和层析得到浓度和纯度最佳的可溶性蛋白,然后免疫家兔得到高效价的抗体。另外,通过腺病毒重组系统,全长ns2基因在293细胞和HepG2细胞中实现全长表达。第三章的内容是关于截短NS2蛋白与细胞因子的相互作用。在第二章的基础上,首先通过His-tag pull-down分析,SDS-PAGE后再通过银染分析,我们得