论文部分内容阅读
目的:以小鼠T细胞淋巴瘤细胞株EL-4为模型,研究灵芝孢子粉对EL-4细胞生长的抑制作用;建立MNU诱导小鼠胸腺T细胞淋巴瘤的裸鼠移植瘤模型,利用裸鼠移植瘤研究灵芝孢子粉对胸腺T细胞淋巴瘤的抑制作用并初步探讨其作用机制。方法:1.第一部分,研究灵芝孢子粉体外对EL-4细胞的抑制作用:(1)用MTT法研究破壁灵芝孢子粉5 g/L、2.5 g/L、1.25 g/L、0.625 g/L、0.3125 g/L五个不同浓度下,对EL-4细胞的抑制作用。(2)应用透射电镜技术检测灵芝孢子粉对EL-4细胞凋亡的诱导作用。(3)用RT-PCR技术检测灵芝孢子粉作用后EL-4细胞Bax、Bcl-2、Bcl-xl基因mRNA表达水平的改变。2.第二部分,胸腺T细胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型的建立建立MNU诱导胸腺T细胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型,并将肿瘤在裸鼠体内连续传代,取第四代裸鼠腋下肿瘤进行HE染色及免疫组化染色,鉴定此肿瘤与模型一致,建立稳定的裸鼠移植瘤。3.第三部分,研究灵芝孢子粉对胸腺T细胞淋巴瘤裸鼠移植瘤的抑制作用并初步探讨其作用机制。采用随机区组设计法随机分为空白组、阳性组及灵芝孢子粉高、中、低剂量组。空白组腹腔注射生理盐水,阳性组腹腔注射环磷酰胺,灵芝孢子粉组分高、中、低剂量组(分别为高剂量4g/kg、中剂量2.1g/kg、低剂量1.05g/kg),灌胃给药。(1)观察裸鼠的活动情况及皮下瘤的生长,给药21天后处死,取瘤组织称重,计算抑瘤率。按公式V=ab2/2(mm3)计算肿瘤体积。(2)取高剂量组及生理盐水组做病理观察,采用苏木精一伊红(HE)染色法观察肿瘤组织结构、细胞坏死和细胞形态改变。(3)电镜观察凋亡细胞形态。结果:1.(1)MTT实验结果显示,灵芝孢子粉对EL-4细胞的生长具有明显抑制作用,并且抑制率随时间及剂量的增加而升高,具有一定的时间和剂量效应关系。浓度为5g/l时,作用时间为48h、7h2、96h后,灵芝孢子粉对EL-4细胞生长的抑制率分别是35.5%、48.1%、40.0%。灵芝孢子粉对EL-4细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72h达到最低,为4.76g/l。(2)透射电镜结果显示,灵芝孢子粉可诱导EL-4细胞凋亡。(3)RT-PCR显示,以5g/l灵芝孢子粉处理EL-4细胞48小时后,Bax基因的mRNA表达明显上调,Bcl-2、Bcl-xl基因的mRNA表达稍下调。2.裸鼠移植瘤的鉴定HE染色表现为弥漫的中等大小的淋巴样细胞,胞质较少,核圆形或椭圆形,染色质细腻,核分裂象多见,少见星空现象。免疫组化显示瘤细胞表达CD3和TDT。与我们前期利用MNU诱导的T细胞淋巴瘤细胞一致。3.裸鼠移植瘤实验显示,(1)灵芝孢子粉给药剂量为4g/kg (高剂量组)、2.1g/kg (中剂量组)和1.05g/kg (低剂量组)时,对裸鼠移植瘤的抑制率分别为45.8%、37.5%和25.0%,其中高剂量组、中剂量组与生理盐水组比较均有显著差异(P<0.01)。(2)肿瘤组织切片,HE染色后镜下观察,灵芝孢子粉高剂量组与生理盐水对照组相比,肿瘤坏死区域较大,核碎屑、细胞固缩较多。(3)透射电镜结果显示,灵芝孢子粉可诱导T细胞淋巴瘤细胞凋亡。结论:(1)灵芝孢子粉在体外可抑制小鼠T细胞淋巴瘤EL-4细胞株的增殖并诱导其凋亡,可能机制是通过上调Bax mRNA,下调Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达实现的。(2)灵芝孢子粉对裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用,其作用机制可能与直接抑制肿瘤生长有关或者与灵芝孢子粉可诱导淋巴瘤细胞的凋亡有关。