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猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属，包含三个血清型。其中PCV1没有致病性。PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)和其它猪圆环病毒相关疾病的原发性病原。PCV3于近期在我国首次检出，与猪只繁殖障碍等疾病相关。近年来猪圆环病毒的感染已遍布世界各国，引起十分严重的经济损失。 为了解山东省规模化猪场生猪主要疫病的血清流行病学特征，夲试验应用ELISA技术对2015年采集自山东地区部分规模化猪场的224份血清样品进行了抗体检测。检测结果表明，猪群中猪瘟(Classical swine fever,CSF)抗体阳性率在20.0%~87.5%，平均为71.2%；猪蓝耳病(Porcine Reproductive and Respiration Syndrome,PRRS)抗体阳性率在5.0%~93.1%，平均为66.8%；猪圆环病毒病的抗体阳性率在38.9%~100%，平均为85.4%；猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies,PR)野毒感染率在0~88.9%，平均为56.5%，免疫抗体阳性率在20.0%~86.1%，平均为61.8%。抗体检测结果表明，山东地区不同规模化猪场的抗体阳性率参差不齐，波动范围较大。部分规模化猪场的抗体阳性率偏低，应该加强免疫，提高抗体水平，以上数据为规模化猪场制定完善的免疫防控方案提供了重要的依据。 猪圆环病毒主要包含与病毒复制相关的Rep蛋白及与免疫原性相关的Cap蛋白。其中Rep蛋白是猪圆环病毒得以复制和扩繁的关键蛋白。PCV2相比PCV1，在第5位氨基酸后连续增加了3个氨基酸(SGR)；在第294位氨基酸后缺失了1个氨基酸(V)。 本实验室前期发现在PK-15细胞中培养PCV2时经常污染PCV1，且污染后连续传代PCV1会逐渐成为优势毒株。为了从分子水平揭示以上现象，拟在前期实验室构建好的PCV感染性克隆的基础上，聚焦于与PCV复制密切相关的Rep蛋白。根据GeneBank中发表的PCV2核苷酸序列，设计引物。通过重叠 PCR方法构建三种含不同氨基酸突变位点的双拷贝PCV2全长克隆，分别命名为2PCV2(dSGR)、2PCV2(vV)、2PCV2(dSGR&vV)，体外转染无PCV污染的PK-15细胞，盲传六代后，用间接免疫荧光方法和透射电镜方法检测，结果表明夲试验构建的双拷贝突变体克隆具有感染性，突变不具有致死性。经Western blot检测，结果表明上述三种突变体病毒均可以有效的表达Rep蛋白。一步生长曲线试验结果显示，这三种突变体病毒生物学特性相似。TCID50测定病毒感染力，荧光定量PCR检测感染细胞的病毒载量，结果显示突变体2PCV2(vV)提高了病毒的复制能力而突变体2PCV2(dSGR)和2PCV2(dSGR&vV)降低了病毒的复制能力。这为进一步揭示PCV1较PCV2更易在PK-15细胞上增殖奠定试验基础，也为下一步研制出能在PK-15细胞上高水平复制的PCV2进而研制免疫原性较好的圆环病毒疫苗奠定了基础。