结核病是由结核分枝杆菌引起的一种流传广、危害大的世界性传染病。近年来,随着流动人口的增加、耐药菌株的不断增加、卡介苗免疫效果欠佳、HIV/ADIS流行日趋严重等,导致结核病的发病率和死亡率不断上升。世界卫生组织宣布“全球结核病紧急状态”,并指出应优先发展有效的结核病疫苗。 降低结核病的患病率和死亡率,有效控制结核病,关键在于对结核病的有效预防,而对结核病的有效预防关键又在于要有安全、高效的结核病疫苗。卡介苗虽然是目前全球唯一用于预防结核病的疫苗,但是其安全性在0-80％,因此,寻找比卡介苗更有效的抗结核疫苗已成为当前国际关注的紧迫而优先的研究内容。ERP基因是存在于卡介苗内的一个毒力基因。敲除卡介苗内的这个毒力基因,将可能会大大提高卡介苗使用的安全性。在这个理论的基础上,本实验室成功构建了卡介苗ERP基因缺失突变株(ERP菌株)。 目的：本课题拟对本实验室所构建的卡介苗ERP基因缺失突变株(ERP菌株)与传统卡介苗(BCG)进行毒力比较研究,观察其毒力的变化,以及是否可以安全地用于后续的研究。 方法：为了对卡介苗ERP基因缺失突变株与传统卡介苗进行毒力比较研究,分别进行了体内、体外实验。 (1)体内实验研究：以BALB/c小鼠作为实验对象,将BALB/c小鼠随机分成三组,分别小鼠背部皮下注射ERP菌株、传统卡介苗、生理盐水。分不同时段解剖小鼠后进行肺脏、脾脏活菌计数；观察小鼠肺脏的组织形态学变化；计算肺脏、脾脏、肝脏系数。在饲养小鼠的整个过程中,记录各组小鼠的死亡时间及数量,死亡者取肺进行病理学检查。 (2)体外实验研究：收集BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,24小时后用ERP菌株和BCG感染收集的巨噬细胞,分别在感染后的第0天、第4天、第7天用1％Triton X-100裂解巨噬细胞,然后将裂解得到的液体稀释后接种于罗氏培养基,培养18天后计数菌落形成单位(CFU)。 结果： (1)ERF菌株和BCG均可在BALB/c小鼠体内定植,ERP菌株在小鼠脾脏和肺脏内的定植显著少于BCG组；接种BCG及ERP菌株的小鼠肺脏病理改变方面结果相似；ERP菌株组、BCG组和NS组肺脏、肝脏、脾脏脏器系数无显著差异,都在正常范围之内。 (2)ERP菌株和BCG均可在小鼠腹腔巨噬细胞中生存繁殖,ERF菌株在小鼠腹腔巨噬细胞内的增殖能力显著低于BCG。 结论：体内、体外实验结果均表明卡介苗ERP基因缺失突变株的毒力较传统卡介苗低,可安全地用于后续研究。