人巨细胞病毒pp65单克隆抗体的制备及其体外中和活性鉴定

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目的 制备具有中和人巨细胞病毒(HCMV)感染作用的单克隆抗体并对其进行生物学活性鉴定。探讨单克隆抗体在临床上的诊断和治疗作用。方法 用HCMVAD169株抗原免疫Balb/c小鼠5-6次后,取致敏的脾细胞和HGPRT SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中培养二周,间接ELISA法筛选阳性克隆,挑取分泌抗体的杂交瘤株:再用间接ELISA进行鉴定,最终获得抗HCMV的阳性杂交瘤细胞4株,用琼脂糖免疫双扩散法鉴定McAbs的亚类。取腹水经盐析法初次提纯HCMV McAbs。Lowry法测定蛋白质浓度。在第6代HF细胞株上进行微量中和试验;同时用辣根过氧化物酶(HRP)标记D7株McAb。结果 获得了4株杂交瘤细胞株,制备的McAbs经间接ELISA和琼脂双扩散试验证实均能和HCMV抗原结合,显示高度特异性。McAbs经盐析后D7株蛋白质浓度为11. 2mg/ml,B5株蛋白质浓度13. 8mg/ml。其中D7株杂交瘤分泌的McAb经间接ELISA和Western-blotting试验证明能和HCMV pp65抗原特异性结合。微量中和实验亦证实该McAb具有中和抗体的性质。经HRP标记的该McAb(中和效价≥1:128) 还能与细胞培养中的AD169株HCMV发生特异性核内及胞浆内染色反应,且比间接免疫酶染法更快速、敏感、简便。结论 通过杂交瘤技术制备的抗HCMVpp65 McAb能和HCMV特异性结合并能在体外中和HCMV致细胞病变效应,为临床快速、准确诊断HCMV活动性感染提供了有力试剂;抗为McAb作为HCMV治疗药物的研发奠定了基础。
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