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目的:研究在无免疫因素情况下,B7-H4基因对卵巢癌细胞SKOV3生物学习性的影响;探讨卵巢癌细胞B7-H4基因高表达对靶向诱导的CTL细胞杀伤作用的影响。方法:从人卵巢浆液性囊腺癌组织中提取总RNA,通过RT-PCR技术扩增B7-H4核心序列,构建B7-H4真核表达载体PEGFP-N1/B7-H4,以空质粒PEGFP-NI作为阴性对照,分别转染至人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3筛选获得稳定克隆,分别命名为SKOV3/B7-H4、SKOV3/neo。通过RT-PCR、荧光技术分别进行mRNA及蛋白水平的鉴定。实验分成实验组(SKOV3/B7-H4组)、阴性对照组(SKOV3/neo组)和空白对照组(SKOV3组),通过MTT实验、流式细胞仪细胞周期和凋亡测定、集落形成实验、细胞黏附实验、划痕实验、Transwell小室侵袭实验检测在无免疫因素情况下B7-H4对卵巢癌细胞的影响。利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34~+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法从SKOV3中提取可溶性冻融抗原并负载DC诱导生成CTL。MTT法检测CTL细胞对三组细胞的杀伤作用。结果:(1)成功构建了B7-H4基因真核表达载体,建立稳定表达B7-H4蛋白细胞株SKOV3/B7-H4及阴性对照组细胞株SKOV3/neo。三组细胞中,实验组B7-H4mRNA表达阳性,融合蛋白定位于细胞膜上,空白对照组及阴性对照均无B7-H4mRNA及蛋白的表达。细胞形态、核浆比例、排列方式无明显改变;(2)通过MTT实验检测细胞增殖能力,培养48h后,实验组积分吸光度分别与阴性对照组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),空白对照组与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);三组细胞生长曲线显示,实验组明显快于阴性及空白对照组;(3)实验组集落形成数为15.25±7.27个,与阴性对照组(13.50±7.55个)及空白对照组(13.75±8.73个)集落形成数两两比较,无统计学差异(P＞0.05),但实验组集落形成直径大,细胞数量较多,细胞排列较紧密;(4)检测三组细胞周期,实验组G2/M期细胞百分比为20.3±2.1,高于阴性对照组(13.2±1.4),差异具有统计学意义(P＜0.05),阴性对照组与空白对照组(14.5±0.6)比较无统计学差异(P＞0.05)。凋亡检测显示,实验组凋亡细胞数百分比为6.33±1.21,低于阴性对照组(10.50±2.88),差异具有统计学意义(P＜0.05),阴性对照组与空白对照组(10.17±3.13)无统计学差异(P＞0.05);(5)在划痕实验中,实验组细胞划痕距离明显缩短,与阴性对照及空白对照组相比,具有统计学意义(P＜0.05);(6)侵袭实验显示,穿膜细胞数实验组为47.00±15.90个,明显高于阴性对照组(26.88±12.99个)及空白对照组(28.90±12.94个),差异均具有统计学意义(P＜0.05);(7)靶向诱导的CTL细胞对实验组细胞杀伤率明显低于阴性对照组(20.12%±3.14%VS 36.34%±4.53%)(P＜0.05)。结论:B7-H4可以直接促进SKOV3细胞的生长,增加迁移及侵袭能力,并抑制靶向诱导的CTL细胞的杀伤作用。在肿瘤形成、转移过程中可能起着重要的作用,有望成为卵巢癌基因治疗的潜在治疗靶点。