高效液相色谱法在几种药用植物分析中的应用研究

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中医药是我国传统医学的瑰宝,在长达五千年的不断发展应用中得到了我国人民的广泛认可与接受。随着历史的推移中药在国际上也产生了较大的影响,亚洲许多国家把中药当作提高健康的重要工具,欧美等发达国家也越来越重视天然药物与传统医学的作用。中药活性成分的分离纯化和分析是中药现代化的重要组成部分,但是中药是一个典型的复杂未知样品,其化学物质基础的阐明是中药现代化的关键科学问题之一。液相色谱是中药分析中应用最普遍的技术,也是进一步与质谱、核磁共振等联用的基本分离手段。因此,如何在色谱理论的基础上,建立系统的、快速的中药液相色谱分析方法发展的平台越来越被人们所重视,这在中药化学物质基础研究中起到非常重要的作用。本论文在前人的工作基础上,主要开展了以下几方面的研究工作:(1)首次建立了同时测定蜂胶液中六种有机酸的高效液相色谱测定方法,为蜂胶液中有机酸类物质的测定提供方法依据,对蜂胶相关产品的质量鉴定标准进行了补充。(2)采用反相高效液相色谱法同时对桑叶和柘叶中的四种植物次生代谢物质(绿原酸、对羟基苯甲酸、苯酚和香豆素)进行分离测定,首次研究探讨了桑树叶和柘树叶中的次生代谢物质在种类和含量等方面存在的差异。(3)采用各种分离纯化技术得到苦楝果实中的苦楝素,并建立了高效液相色谱荧光检测法测定苦楝果实中苦楝素的新方法。结果表明,该法简便、快速、灵敏、重现性好。(4)建立了炮制前后决明子药材的HPLC指纹图谱,为研究炮制前后决明子药材的质量变化、保证产品质量的稳定性提供一定的依据。本论文共分为五章。第一章:绪论部分从高效液相色谱的特点、色谱技术方面的进展以及在中草药研究中的应用几个方面详细介绍了HPLC分析技术的研究进展与应用现状。第二章:建立了蜂胶中6种有机酸的高效液相色谱测定方法。固定相为EclipseXDB-C18柱(4.6 mm×150 mm;5μm),流动相为乙腈-0.4%的冰醋酸溶液(30:70,V/V,pn 2.9),流速0.8 mL/min,柱温28℃。采用设定波长程序的方法进行检测,样品中6种组分的加标回收率在89.35%~104.5%之间,绿原酸、咖啡酸、香草酸、阿魏酸、苯甲酸、肉桂酸的线性范围分别为0.022~44、0.025~50、0.029~58、0.022~44、0.0414~62.1、0.0444~66.6μg/mL,检测限分别为4.55、3.95、8.7、6.29、10.35、3.92 ng/mL,相对标准偏差小于3%。该法简便、快速、灵敏,可用于蜂胶中6种有机酸的同时分离测定。第三章:建立了一种同时测定四种植物次生代谢物的反相高效液相色谱法。采用Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(0.1%H3PO4pn为3.5)(30:70,V/V)为流动相,采用梯度洗脱,柱温为20℃,检测波长为λ1=325nm;λ2=254 am;λ3=218 nm。绿原酸、对羟基苯甲酸、苯酚和香豆素的线性范围分别为440~1.35、400~1.25、960~3.00、400~1.25 mg/L,相关系数均大于0.999。检测限分别为0.27、0.25、0.60、0.25 mg/L。该方法灵敏快速,结果可靠,重现性好,可用于桑叶和柘叶中这四种化合物的分离测定。第四章:建立了一种快速、有效的高效液相色谱荧光检测法测定苦楝果实中苦楝素的新方法。苦楝果实原料经过一系列的提取和纯化步骤后,再进行分析测定。采用Eelipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm;5μm),流动相组成为甲醇-水,采用梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长为Ex=230 nm,Em=320nm。样品加标回收率为98.4%~101.5%,峰面积的相对标准偏差低于3.0%。检测限为4.68μg/mL,苦楝素的线性范围为7.625-610.0μg/mL。与此同时,对收集到的苦楝素组分采用红处光谱和质谱手段进行了表征。该方法可以成功地用于苦楝果实中苦楝素的分析测定,结果令人满意。第五章:采用高效液相色谱法研究并建立了炮制前后决明子药材的指纹图谱。色谱柱为Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(0.1%H3PO4调其pH为3.0),梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温:30℃,检测波长为278 nm。结果证明该方法准确、可靠,为更好地研究和控制决明子药材的炮制、保留决明子的有效成分提供一定的方法依据。
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