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目的:抗磷脂综合征,简称为APS,它是一种由抗磷脂抗体(APL)引起的自身免疫性疾病。通过大量的临床观察,它的主要症状表现为如下两个方面:一是持续不断的妊娠丢失;二是形成动静脉血栓。本实验目的是研究经口服重组人β2糖蛋白1(rhβ2-GP1)后,实验性抗磷脂综合征(EAPS)小鼠的PBMC中辅助性T细胞17(Th17)和CD4+CD25highCD127lowT细胞的变化。方法:1、用重组人β2-GP1免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型组、用联合口服重组人β2-GP1及重组人β2-GP1免疫小鼠的方法建立耐受组。2、采用流式细胞术检测方法,分别检测EAPS模型组、口服耐受组和实验对照组三组小鼠外周血PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分率和CD4+CD25highCD127lowT细胞百分率。3、应用RT-PCR方法检测各组小鼠PBMC的转录因子RORγt-mRNA的相对表达量和Foxp3 mRNA的相对表达量。结果:1、采用流式细胞术检测方法,分别检测EAPS模型组、口服耐受组和实验对照组三组小鼠外周血PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分比,自免疫的第1个月到第5个月,模型组与正常对照组相比小鼠PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分比略有升高,具有显著差异性(p<0.05)。耐受组小鼠外周血PBMC中CD4+IL-17+Th17细胞百分率在各时间段与对照组相比没有不同,差异没有显著性(p>0.05)。2、免疫后第1、2、3、4、5个月,模型组小鼠PBMC的RORγt mRNA表达高于正常对照组小鼠(图2,p<0.05);耐受组小鼠PBMC的RORγt基因表达自免疫的第1个月到第5个月均低于模型组(p<0.05);自免疫的第1个月到第5个月,对耐受组与正常对照组进行比较结果没有差别(p>0.05)。3、模型组在第1个月和第2个月时与对照组相比虽然没有差别(p>0.05),但从第3个月开始下降,差异开始逐渐呈现(p<0.05)。在免疫的第1、2、3、4、5个月,对照组小鼠与耐受组小鼠PBMC中CD4+CD25highCD127lowT细胞比较两者没有差别(p>0.05)。4、在免疫的第1、2、3、4、5个月时对小鼠PBMC中转录因子Foxp3的相对表达量进行检测(如图4),在第1、2个月,模型组小鼠表达水平与耐受组无差异(p>0.05);第3月、4月、5月模型组与耐受组相比mRNA表达水平下降,差异具有显著性(p<0.05),在第1、2、3个月时,耐受组小鼠PBMC的Foxp3基因的表达高于对照组(p<0.05),4月和5月与正常对照组比较无明显差异(p>0.05);结论:1、EAPS模型组小鼠PBMC中Th17细胞的百分比及其转录因子RORγt mRNA的表达水平与对照组相比都略有升高,而通过口服重组人β2-GP1建立的耐受组小鼠的各项指标均与对照组相近,故而我们认为APS进展Th17的过度分化可能有一定的关系。2、EAPS模型组小鼠从第3个月PBMC中CD4+CD25highCD127lowT细胞百分比开始下降,而通过口服重组人β2-GP1建立的耐受组小鼠PBMC中CD4+CD25highCD127lowT细胞百分比在1月到5月与对照组相比没有差别,故而我们认为口服耐受可能通过调节调节性T细胞的分化而发挥一定的作用。