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先前的研究表明,在辐照致弱（RA）血吸虫免疫小鼠模型中,高保护性免疫效果是通过RA早期童虫诱导宿主产生特征性的先天免疫,形成有利于保护性CD4+T细胞分化的获得性免疫应答环境;其中来源于早期童虫的应急分子如热休克蛋白等可能发挥了重要作用。本研究旨在探索日本血吸虫热休克蛋白70（SjHSP70）在先天性免疫应答中的功能作用,以期为深入阐明RA血吸虫疫苗的保护机制奠定基础。1、SjHSP70诱导宿主巨噬细胞极化的研究。SjHSP70与RAW264.7巨噬细胞共孵育2448 h,同时设置M1（LPS）、M2（IL-4）阳性对照组,Griess法检测胞外NO含量,精氨酸酶活性检测定量检测精氨酸酶的含量,流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测巨噬细胞标志分子,RT-PCR检测标志分子mRNA转录表达。Griess法结果显示,SjHSP70能够显著促进巨噬细胞NO的分泌（P<0.001）;精氨酸酶活性检测结果,精氨酸酶活性达到6.15U/L,显著高于对照组（P<0.001）;FCM结果显示,SjHSP70刺激组M1型标志分子CD16/32和iNOS表达明显上调,而M2型标志分子CD206没有明显变化;RT-PCR结果表明iNOS显著上调（P<0.05）,ArginaseⅠ表现上调（P<0.01）,而CD206表现下调（P<0.05）。提示SjHSP70可以诱导巨噬细胞极化,前期偏向于M1极化,共孵育48 h时偏向于M2极化。2、分析SjHSP70诱导致敏小鼠淋巴细胞反应。小鼠用重组SjHSP70免疫致敏,验证免疫原性后余下小鼠感染50条尾蚴饲喂42d。流式细胞术（FCM）检测致敏小鼠和它们感染50条尾蚴42d后小鼠淋巴细胞中CD4+与CD8+T细胞的比值;SjHSP70刺激致敏淋巴细胞72 h后,MTT法检测混合淋巴细胞增殖,FCM检测淋巴细胞中CD4+T细胞因子表达,RT-PCR检测淋巴细胞的细胞因子的表达。结果显示,SjHSP70可以促进致敏淋巴细胞增殖,且增殖指数为2.59（SI>2）;SjHSP70免疫组CD4+/CD8+T细胞的比值为2.83,显著高于对照组2.46（P<0.001）;经重组SjHSP70再刺激的致敏淋巴细胞的CD4+T细胞胞内IL-4水平明显高于PBS对照组;淋巴细胞细胞因子RT-PCR结果表明,SjHSP70免疫组IL-4、IL-10和TNF-ɑ明显上调（P<0.05）,IFN-γ明显下调（P<0.01）;感染尾蚴后CD4+/CD8+T比值为2.66相比不显著。提示SjHSP70能够诱导小鼠Th2型免疫应答。3、探究SjHSP70活化小鼠DC的TLR2/TLR4信号途径的分子机制。TLR2-/-敲除、TLR4-/-敲除和野生型C57BL/6J小鼠骨髓来源的DC用重组的SjHSP70刺激。扫描电镜观察细胞形态、FCM检测DC表面TLR2和TLR4的表达、RT-PCR检测DC细胞因子和IкBɑ在mRNA水平上的表达。结果显示,在TLR2-/-敲除小鼠DC细胞表面观察不到枝状突起,而在TLR4-/-和野生型的小鼠DC细胞表面则可观察到明显的树突结构,提示SjHSP70活化DC可能通过TLR2途径;FCM结果表明TLR2途径在DC活化中占主导地位;SjHSP70诱导DC经TLR2途径活化后,分泌的Th1炎性细胞因子IFN-γ减少,而IL-6和IL-1β分泌增加,提示这可能导致DC与CD4+T细胞作用的微环境偏向于Th2型;IкBɑ检测结果表明SjHSP70活化DC可能依赖于NF-кB信号途径。结果提示,SjHSP70活化DC的信号途径可能以依赖于NF-кB的TLR2途径为主。综上所述,本研究发现SjHSP70能够诱导小鼠巨噬细胞极化,前期以M1极化为主、48 h后M2极化占主导;SjHSP70能够活化DC并且促进CD4+T细胞向Th2型分化;DC的活化可能与TLR2为主的NF-кB信号传递途径相关。该研究初步明确了SjHSP70在先天免疫中的作用,也为阐明SjHSP70在RA血吸虫疫苗模型中的功能和分子机制奠定基础。