第一部分mi R-124在胃癌中表达降低胃癌在全世界属常见的恶性肿瘤之一,在我国发病率及死亡率均居恶性肿瘤的前列。但胃癌发病的分子机制至今尚未完全明了,新近大量肿瘤表观遗传学研究资料表明,在人类多种肿瘤的发生发展过程中存在表观遗传学的改变。表观遗传调控机制包括:DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重构及非编码RNA等。非编码RNA是近年来的肿瘤研究新热点之一,mi RNA参与了胃癌的发生发展及转移等过程。研究表明mi R-124在人类多种肿瘤中发挥着抑瘤基因的作用,其在胃癌中的表达及意义尚不清楚。目的:检测分析mi R-124在胃癌细胞及组织中的表达。方法:本研究采用q RT-PCR,检测了mi R-124在永生化胃粘膜上皮细胞GES1及胃癌细胞系MKN-74、MKN-28、MKN-45、MGC-803、SGC-7901及AGS中的表达;采用原位杂交,检测了mi R-124在胃癌及癌旁正常组织中的表达,分析mi R-124表达与胃癌患者临床病理意义及预后的关系。结果:mi R-124在MKN-74、MKN-28、MKN-45、MGC-803、SGC-7901及AGS细胞中的表达,均低于GES-1细胞;mi R-124在胃癌组织表达降低或缺失,而在癌旁胃粘膜中的表达呈强阳性,mi R-124表达与胃癌病理组织学分级、TNM分期及淋巴结转移密切相关,而与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关,mi R-124低表达与患者预后及生存时间有关。结论:mi R-124在胃癌组织及细胞系中均存在mi R-124的表达下降,其表达与胃癌分级、分期及淋巴结转移及患者预后相关。第二部分mi R-124调控EZH2表达对胃癌细胞系增殖及药物增敏性mi RNA在肿瘤细胞的生长增殖、周期调控、凋亡、侵袭转移、血管形成、上皮间质样变及干细胞特性维持等过程发挥重要作用;mi R-124具有抑制肿瘤生长、增殖及化疗药物增敏作用。目的:探讨初步mi R-124在胃癌中的作用及分子机制。方法:本研究采用MTT法,检测mi R-124的转入,对胃癌细胞系生长增殖及5-Fu药物增敏作用的影响;采用软琼脂克隆形成实验,检测mi R-124转入MKN-45、AGS细胞系,对MKN-45、AGS细胞克隆形成能力的影响;施用裸鼠成瘤实验,探讨mi R-124对裸鼠荷瘤生长增殖的影响,体内实验验证mi R-124在胃癌细胞的作用。通过在线软件预测分析mi R-124的靶基因,EZH2基因可能是mi R-124所调控的靶基因,运用荧光素酶报告分析、q RT-PCR及Western blot等方法,实验证实EZH2基因是mi R-124所调控的靶基因;采用免疫组织化学及原位杂交方法,分析mi R-124与EZH2在胃癌组织中表达、相关性及临床病理意义;MTT法,检测EZH2对AGS细胞系增殖影响,分析mi R-124增强AGS细胞对5-Fu的敏感性。结果:转染mi R-124 mimics后,GES-1、MKN-74、MKN-28、MKN-45、MGC-803、SGC-7901及AGS细胞的存活率分别为:91.6±9.3%、68.4±5.7%、54.7±3.5%、64.2±6.1%、38.9±3.7%、43.6±5.2%及63.1±4.8%;与GES-1比,MKN-74、MKN-28、MKN-45、MGC-803、SGC-7901及AGS细胞的存活率均显著降低。转染mi R-124 mimics后,MKN-45细胞克隆形成率(22.3±2.1%)与AGS细胞克隆形成率(59.1±4.7%)均较对照组降低。裸鼠成瘤实验表明,mi R-124 mimics治疗组移植瘤大小及重量明显小于对照组。mi R-124可增加5-Fu对AGS细胞的抑制作用。mi R-124可以与EZH2 3’UTR结合,并在胃癌细胞中抑制其表达,并且EZH2在胃癌组织中的表达与mi R-124呈负相关。EZH2的表达与胃癌患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移无关,但是与肿瘤分化程度密切相关。EZH2 si RNA转染AGS细胞后24 h的增殖率与对照组无显著差异,而48 h及72 h的细胞增殖率明显低于对照组。mi R-124 inhibitor与si-control组的细胞增殖率大于inhibitor control与si-control组,EZH2 si RNA与inhibitor control组细胞增殖率低于inhibitor control与si-control组,而mi R-124 inhibitor与EZH2 si RNA组的细胞增殖率较对照组无明显变化。结论:mi R-124可体外抑制胃癌细胞增殖,体内抑制成瘤,并增加胃癌细胞对5-Fu的药物敏感性,mi R-124的直接靶基因EZH2在胃癌组织中表达与肿瘤分化程度相关,参与了mi R-124对胃癌细胞5-Fu敏感性的调控。