【摘 要】
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目的:通过探讨GRP78在糖尿病大鼠逼尿肌细胞内质网应激病变发生发展,特别是逼尿肌细胞凋亡过程中的作用和机制,揭示GRP78在糖尿病大鼠逼尿肌细胞内质网应激病变发生发展中的
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目的:通过探讨GRP78在糖尿病大鼠逼尿肌细胞内质网应激病变发生发展,特别是逼尿肌细胞凋亡过程中的作用和机制,揭示GRP78在糖尿病大鼠逼尿肌细胞内质网应激病变发生发展中的动态演变规律变化,为DCP的病因学研究提供重要的实验依据。方法:在本研究中,我们选取GRP78作为ERS的标志性因子,取健康清洁级成年雌性Sprague-Dawley大鼠50只随机平均分为4组糖尿病组和1组正常对照组。糖尿病组采用一次注射法经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50mg/kg,注射后72小时行鼠尾静脉血糖浓度>16.7mmol/L为模型成功。分别在4周、8周、12周、16周处死大鼠,切除膀胱组织,并去除周围脂肪和结缔组织,分别采用tunel法测定逼尿肌细胞凋亡率和电镜下观察逼尿肌细胞内质网形态学变化。用RT-PCR技术检测及Western-Blot技术动态研究糖尿病大鼠逼尿肌细胞凋亡水平与GRP78表达情况的相互关系,并进行所有数据的统计学分析。结果:糖尿病大鼠造模成功即出现多饮、多食、排尿增多,体型明显消瘦,毛发变黄变硬,光泽度下降,出现嗜睡对外界条件反应迟钝,个别糖尿病大鼠四肢溃烂,对疼痛不敏感,对照组大鼠饮食状况正常;糖尿病各组凋亡率随着时间的递增而升高,12w时升高趋势明显,凋亡趋势呈时间依赖性;在电镜下糖尿病组逼尿肌细胞的内质网细胞核周围大量内质网无序排列,体积增大,为白色不规则空泡样结构,浆膜附着核糖小体;RT-PCR检测结果显示,4w组和8w组明显高于对照组,12w组表达水平最高,是对照组的8.87倍,而16w组表达水平较12w有所下降。Western–blot检测结果显示,GRP78蛋白表达水平4w组较对照组出现升高,8w组表达水平最高,是对照组的1.45倍,而12w组和16w组较8w组明显下降。结论:DCP逼尿肌细胞凋亡与内质网应激密切相关,其中GRP78表达水平的改变是至逼尿肌细胞凋亡的重要病变机制,随着糖尿病病程的进展,GRP78与DCP有明显的相关性。通过研究DCP的病变与GRP78的关系,会使我们对于糖尿病膀胱病因学机制的理解更加深入并且为其治疗提供新的潜在治疗靶点。
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