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桃汁多味美,深受人们喜爱。然而,桃果独特的成熟衰老特性使其贮藏保鲜难度很大。果实的成熟与乙烯的生物合成密切相关,在乙烯生物合成过程中,ACC合成酶和ACC氧化酶是两个关键酶。本研究以水蜜桃新品种“新白花”等为试材,开展了与成熟相关ACC合成酶基因的分离及桃、番茄离体培养遗传转化体系的建立等方面的工作,为运用基因工程技术延长桃果实贮藏期奠定了重要基础。 改进了桃基因组DNA的提取方法:将裂解缓冲液中CTAB提高到3%,加入3%PVP,并延长水浴时间至1.5h。采用该改进方法得到的DNA溶液多糖含量少且无褐化现象,适于后续的分子生物学操作。 以上述提取的桃基因组DNA为模板,根据桃品种“Hakuho”成熟相关的ACC合成酶基因cDNA序列,设计了两对特异引物P1、P2及P3、P4,利用PCR方法扩增得到了两个特异片段,经过拼接获得了桃基因组ACC合成酶基因的完整序列（GenBank Accession:AY994054）,并对其进行了生物信息学分析。该序列全长2496 bp,包括4个外显子和3个内含子,4个外显子共长1479 bp。桃ACC合成酶基因编码区与蔷薇科梅（Prunus mume）和梨（Pyrus communis）的同源性分别为98%和84%,除终止密码子外,编码492个氨基酸,其中有SLSKDMGLPGLR共12个氨基酸残基的保守区,位于274至285氨基酸残基处,被认为是ACC合成酶的活性中心。推测该酶分子量约为55 kD,pI为8.26。 番茄是基因转化研究的模式植物,且桃与番茄均为跃变型果实,它们的ACC合成酶基因同源性约70%。将桃ACC合成酶基因分别转入桃与番茄,通过比较基因同源转化与异源转化的差异,以深入研究基因的表达与调控。因此,必须建立桃与番茄两者的离体转化体系。 以“新白花”水蜜桃多年生植株的幼嫩茎尖和茎段为外植体,MS为基本培养基,比较了不同浓度（0.0,0.2,0.5,1.0,2.0 mg/L）的6-BA和不同浓度（0.0,0.01,0.1,0.5,1.0,2.0 mg/L）的IBA对腋芽萌发、枝芽增殖等的影响。研究结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L为最适的腋芽萌发培养基;MS+6-BA 1.0 mg/L为最适的枝芽增殖培养基;MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L为最适的无根苗