拟南芥CDF家族基因AtMTP6的功能研究

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CDF蛋白家族是最近发现的一个阳离子转运蛋白家族,在维持金属动态平衡和耐受方面起很重要的作用。拟南芥基因组测序完成后,序列分析表明拟南芥CDF家族至少由12个成员构成,命名为AtMTP1-12,本研究克隆AtMTP6并初步鉴定其功能。AtMTP6位于第二条染色体上,编码一个含有471aa的蛋白质,结构分析表明其具有CDF家族的一些共同特征,如C端有一个CE功能域、N端有一段信号序列,但与已鉴定的成员不同的是它只含有五个跨膜区。本研究包括克隆、鉴定生化及生理功能、描述亚细胞定位,并取得了以下结果:1.通过RT-PCR克隆AtMTP6,测序结果显示其序列与AGI预测的序列完全一致。将AtMTP6基因的cDNA构建至原核表达载体pTrc99A,重组载体转化大肠杆菌突变株KAM3,平板上的结果表明,此基因的表达使细菌对Zn2+、EtBr更加敏感。2.通过与绿色荧光蛋白(GFP)融合,在共聚焦显微镜下显示此蛋白定位于细胞器上,此结果与在线软件PSORT的预测结果比较一致,且预测AtMTP6很有可能定位于线粒体膜上。3.为了研究AtMTP6的生理功能,过表达AtMTP6的转基因拟南芥、互补转基因拟南芥、纯合T-DNA敲除突变体和野生型四种材料同时在正常或胁迫的平板上进行表型观察,结果显示:过表达植株对EtBr更加敏感,可见AtMTP6可能从细胞质转运EtBr进入线粒体中,引起线粒体内EtBr的积累从而对细胞造成损害;四种材料生长于含不同浓度Zn2+的平板上时没发现什么表型;过表达植物的种子种皮颜色较浅且尺寸较小,可见AtMTP6可能与色素转运有关;在含有甘露醇的高渗平板上,过表达植物种子的萌发很明显被抑制,可见AtMTP6与渗透胁迫有关;在正常生长条件下,过表达植物开花要明显早于其它三个材料,表明AtMTP6可能参与调控或确定植物的开花时间。
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