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目的:内质网应激是非酒精性脂肪肝(NAFLD)发展的关键诱导因素。受其影响,NAFLD中发生极低密度脂蛋白(VLDL)代谢失常和NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活。在我们的前期研究中发现,广藿香油能通过减少肝脏脂肪变性来缓解NAFLD。因此,我们推测广藿香油的主要成分广藿香醇对NAFLD有保护作用。在本研究中,我们旨在探索广藿香醇抗NAFLD作用与内质网应激介导的VLDL代谢异常以及NLRP3炎症小体激活之间的关系,阐明广藿香醇缓解NAFLD的机制。方法:1.广藿香醇抗单纯非酒精性脂肪肝的作用研究将48只雄性SD大鼠随机分为六组(n=8):模型组(高脂饲料,HFD),正常组(正常饲料,ND),阳性药组(维生素E,VE,100mg/kg)和广藿香醇三个剂量(10,20,40mg/kg)给药组。除ND组外(正常饲料喂养),其他组均给予高脂饲料喂养4周以建立单纯非酒精性脂肪肝(NAFL)模型。造模同时每天给予相应的药物治疗。试验结束后,测定血清中丙氨酸氨基转移酶(AST)和天门冬氨酸氨基转移酶(ALT)的含量以进行肝损伤程度评估。测定肝脏和血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的含量以进行脂质参数评估。通过对肝组织切片做H&E染色和油红O染色进行病理分析,测定游离脂肪酸(FFA)、VLDL、载脂蛋白B 100(apoB 100)和氧化应激相关因子活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。并通过western blot测定肝脏中内质网应激相关蛋白肌醇需求激酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、双链RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)和葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)的表达。除此之外,还测定了肝脏中VLDL代谢相关蛋白apoB 100、微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)、极低密度脂蛋白受体(VLDLR)及其上游因子的表达。2.广藿香醇抗非酒精性脂肪肝炎的作用研究将48只雄性SD大鼠随机分为六组(n=8):HFD组,ND组,阳性药组(VE,100mg/kg)和广藿香醇三个剂量(20,40,80mg/kg)给药组。除ND组外,其他组均给予高脂饲料喂养8周以建立非酒精性脂肪肝炎(NASH)模型。造模同时每天给予相应的药物治疗。试验结束后,测定AST和ALT含量,评估脂质参数,进行病理分析,测定FFA和氧化应激相关因子的含量以及肝脏中内质网应激和NLRP3炎症小体相关蛋白凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、NLRP3和半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达。除此之外,还测定了肝脏中NLRP3炎症小体的下游因子白介素-1β(IL-1β)和IL-18以及促炎细胞因子IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:1.广藿香醇抗单纯非酒精性脂肪肝的作用研究与喂食正常饲料的大鼠相比,高脂饲料诱导的NAFL大鼠出现内脏肥胖,AST和ALT含量升高,内质网应激加剧和VLDL含量减少。广藿香醇治疗可降低血清中AST和ALT的水平,抑制内脏脂肪的积聚,减少TG和TC的含量,改善肝脏病理情况。同时,广藿香醇能通过减少FFA、ROS和MDA的含量,增加SOD、CAT和GSH的含量来缓解氧化应激。广藿香醇还能下调GRP78的蛋白表达以及抑制PERK、IRE1α和ATF6的活化,从而减轻内质网应激。另外,广藿香醇可进一步促进apoB 100的表达与分泌,增加MTP的表达,抑制VLDLR及其相关蛋白的表达,进而恢复VLDL的代谢,改善肝脏脂质堆积和脂肪变性。2.广藿香醇抗非酒精性脂肪肝炎的作用研究与喂食正常饲料的大鼠相比,除内脏肥胖、AST和ALT含量升高、脂质堆积与内质网应激加剧外,高脂饲料诱导的NASH大鼠肝脏中的NLRP3炎症小体也被激活。广藿香醇治疗能够抑制肝脏中PREK信号通路的活化,减少C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达,从而抑制NLRP3炎症小体的活化。广藿香醇能通过下调肝脏中ASC和NLRP3的表达,从而降低cleaved-caspase-1/pro-caspase-1的比值,进而减少下游细胞因子IL-1β和IL-18分泌。此外,促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌也被显著降低。结论:在本项研究中,广藿香醇被证实能有效缓解NAFLD,并能通过抑制内质网应激对NAFLD大鼠发挥肝保护作用。在NAFL中,其作用机制可能是通过改善VLDL代谢,减少肝脏脂质蓄积和脂肪变性来阻止疾病进展。在NASH中,广藿香醇可能通过抑制NLRP3炎症小体的激活来减少炎症反应,从而发挥肝保护作用。