【摘 要】
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为了进行丙型肝炎(HCV)治疗性DNA疫苗的研制,本实验成功建造了HCV感染的细胞模型。以红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,将其分别插入乙肝核心抗原基因(HBc)的
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为了进行丙型肝炎(HCV)治疗性DNA疫苗的研制,本实验成功建造了HCV感染的细胞模型。以红色荧光蛋白(RFP)和绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,将其分别插入乙肝核心抗原基因(HBc)的e1 loop和e2 loop处,构建质粒pcDNA 3.1-HBc-GFP和pcDNA 3.1-HBc-GFP并在Hela细胞内表达。构建了含有HCV T细胞表位的真核表达质粒pcDNA3.1-HBc-T1T2,通过RFP和GFP表达情况的观察、质粒pcDNA 3.1-HBc-T1T2表达产物HBcAg-T1T2电镜下成颗粒性观察及融合蛋白HBcAg-T1T2三维构象展示,证实了HBc作为疫苗免疫载体的可行性。真核表达质粒pcDNA 3.1-HBc-T1T2肌肉注射免疫小鼠,适时进行了抑瘤实验、CTL细胞毒活性、HBcAb、脾淋巴细胞胞内细胞因子IL-4和IL-γ、血清中细胞因子IL-5、IL-10和IL-12、脾淋巴细胞刺激指数(SI)、血液和脾淋巴细胞亚群、IgG2α/IgG1及脾淋巴细胞培养上清中IL-2水平的检测,以对真核表达质粒pcDNA 3.1-HBc-T1T2的免疫原性进行分析。本研究结果揭示了,真核表达质粒pcDNA3.1-HBc-T1T2能够诱导出特异性的细胞免疫应答,可作为HCV治疗性DNA疫苗的候选,本实验为HCV的治疗奠定了基础。
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