多杀菌素产生菌菌种选育及原生质体制备

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多杀菌素(spinosad)是由放线菌刺糖多孢菌(Saccharoplyspora spinosa)产生的新型大环内酯类化合物,是一种绿色广谱杀虫剂,兼具生物农药的安全性和化学农药的快速效果。多杀菌素具有,以获得高产菌株。以多杀菌素产生茵S. spinosa 5-11为出发菌株,经紫外线诱变处理后,在含不同浓度的多杀菌素梯度平板上筛选多杀菌素抗性菌株,经摇瓶发酵筛选得到一高产变异株107-2,其产量较出发菌株增加59.1%。将变株S. spinosa 107-2在3L发酵罐上进行发酵试验,其产量达到453mg/L。 考察了葡萄糖及无机磷酸盐对刺糖多孢菌菌体生长及多杀菌素产量的影响。研究结果表明:在多杀菌素发酵过程中,葡萄糖浓度的提高(18.6~58.8g/L)促进了菌体的生长,多杀菌素效价增加;葡萄糖浓度的进一步提高(58.8~79.6g/L),菌体生长保持相对稳定,效价缓慢下降;葡萄糖浓度增加到115.3g/L,菌体生长受到明显抑制,效价大幅下降。磷酸盐浓度的提高(3.68~29.41mmol/L)菌体密度和多杀菌素效价增加,磷酸盐浓度的进一步提高(29.41~44.12mmol/L),菌体浓度缓慢增加,多杀菌素效价降低;当磷酸盐浓度增至57.62mmol/L,菌体密度和多杀菌素效价均明显下降。因此,在磷酸盐浓度为29.41mmol/L,葡萄糖浓度为58.8g/L条件下的发酵过程中,多杀菌素产量最高。将出发菌株S. spinosa107-2在5L发酵罐上进行发酵试验,培养基中葡萄糖浓度为58.8g/L,磷酸盐浓度为29.41mmol/L,多杀菌素效价达507mg/L。 初步确定了多杀菌素产生茵原生质体制备的条件和过程,原生质体再生率达到16.1%。
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