猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是严重危胁到全球养猪业的传染性疾病,其病原体是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。PRRSV编码的非结构蛋白nsp2、nsp3和nsp5是跨膜蛋白。为了探究这几个跨膜蛋白在病毒复制转录复合体(RTC)形成中的作用,本研究筛选并鉴定了与这三个跨膜蛋白存在相互作用的非结构蛋白。首先采用酵母双杂交技术(Y2H),筛选出与nsp2、nsp3和nsp5有相互作用的蛋白,然后用双分子荧光互补(BiFC)技术验证了这些存在相互作用的蛋白,以去除假阳性结果。通过Y2H和BiFC,检测到nsp9、nsp12和跨膜蛋白nsp3、nsp5与多个非结构蛋白有相互作用,表明这些非结构蛋白可能充当RTC形成的核心组分。最后使用Pull-down技术进一步验证其中的部分蛋白间的相互作用。包含预测的跨膜结构域的疏水性非结构蛋白nsp2、nsp3和nsp5被认为涉及膜修饰和双层膜囊泡(DMV)的形成,这是由动脉炎病毒感染诱导的典型结构。在PRRSV的3种跨膜的非结构蛋白之间,我们发现nsp2与nsp3、nsp5与nsp3存在相互作用,并且nsp3自身也可以相互作用,因此推测这三种PRRSV跨膜蛋白可能在病毒复制过程中形成膜结合的nsp2-nsp3(×n)-nsp5复合体,即以nsp3为中心,nsp2和nsp5为侧翼形成一个锚定在DMV膜上的一个支架,为复制转录复合体的形成起到招募非结构蛋白,并给以nsp9和nsp12为中心的RTC结构提供支撑,从而参与病毒的复制转录过程。