枳棋分布广、产量高、生长快,具有较高的经济价值。氨基酸是人体必需物质,而枳椇中的非蛋白质氨基酸具有很强的药用价值。为了使枳椇得到更好的应用,本文对枳棋中含量较少的游离氨基酸进行了研究,首先对枳椇肉质果梗中游离氨基酸进行提取和分离,其次研究了其益生功能,主要研究内容如下:1.以枳椇肉质果梗为原料,选取了提取温度、提取时间和液料比及提取次数4个因素分别进行单因素实验,通过比较游离氨基酸的得率,并综合考虑实验中的其它影响因素,确定了各因素在响应面法实验设计中的中心点,其中提取次数、提取时间和液料比的中心点分别为:2次、60min和200 ml/g,选择提取温度为100℃。2.在单因素实验基础上,选择提取次数、提取时间及液料比3个参数进行3因素3水平的CCD实验,以氨基酸的得率为响应值:得到能够提供最高氨基酸产量的最佳提取条件为:提取次数2.23次;提取时间61.94 min;最佳液料比17.76 mL/g。优化条件为提取时间62 min;最佳液料比17 mL/g;提取次数2次。3.在对枳椇肉质果梗游离氨基酸分析的过程中,发现未知成分。衍生化法具有较高的特异性,使用衍生化方法检测准确性较高,由此推断此化合物很可能为新的非蛋白质氨基酸,或者为氨基酸代谢中间产物,亦或是肽等等。又因为未知化合物为特异性检出,所以认为其理化性质与氨基酸相似,因此通过类似于氨基酸的提取工艺对其分离纯化是可行的。4.对枳椇肉质果梗中游离氨基酸未知成分进行初步分离纯化。在经过NKA-2大孔树脂吸附和醇沉之后,得到了纯度较高的未知物提取液。5.本实验通过体外粪样混合的厌氧培养方式研究枳椇未知物提取液和GABA对肠道微生物菌群的影响。FISH计数的结果显示了:GABA和枳椇提取物对肠道内菌群的生长有促进作用,其中显著增加了有益菌群乳酸菌和双歧杆菌的含量;对于有害菌真细菌梭菌的抑制效果明显;对于有害菌拟杆菌没有抑制作用,但是在发酵24h时,发酵液中拟杆菌的含量低于空白对照;对于梭状菌的生长没有明显效果,既不促进也不抑制。通过对有机酸的含量进行检测,发现实验组乳酸的含量明显高于空白对照,这是由于GABA和枳椇提取物对乳酸菌的生长有促进作用,进而乳酸的含量明显提高。同时总酸含量高于空白对照,可以得出结论:GABA和枳椇提取物可以被肠道所利用,生成短链脂肪酸。