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胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-IR)是一跨膜受体，由α和β两个亚单位组成，它广泛表达于多种类型的细胞的表面，介导了IGF-Ⅰ(胰岛素样生长因子Ⅰ)和大部分IGF-Ⅱ的生物学活性，它可以促进机体的蛋白质和核酸DNA的合成以及碳水化合物的代谢。而且它与细胞的生长分化，胚胎的发育密切相关，当其表达过度时，细胞则可以向恶性表型转化。在多种肿瘤中(包括乳腺癌、结肠癌、小细胞肺癌等)都已检测到IGF-IR及其配体的表达异常。本实验通过研究，比较了非小细胞肺癌细胞株A549细胞和淋巴细胞在外源性rIGF-Ⅰ的作用下，在细胞转录水平上，其自身IGF-IR的表达变化。本实验同时研究了这两种细胞在血清撤除情况下，其IGF-IR的表达情况，并初步探讨了IGF-IR在肺癌发生及发展过程中的作用。 [目的] 研究肺腺癌细胞株A549细胞和淋巴细胞在外源性胰岛素样生长因子Ⅰ作用下，各自IGF-Ⅰ受体(IGF-IR)mRNA的转录情况。同时研究血清撤除对两者rIGF-Ⅰ受体表达变化的影响，探讨在肺癌发生过程中IGF-IR表达失控的机理，为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供一定的理论依据。 [材料和方法] 实验分两个部分来研究外源性rIGF-Ⅰ对A549细胞和淋巴细胞IGF-IR mRNA表达的影响。在实验第一部分中研究了在一固定浓度的rIGF-Ⅰ的刺激下，细胞IGF-IR的表达情况。实验采用RPMI 1640+10％小牛血清(完全1640培养液)体外培养非小细胞肺癌A549细胞，待细胞处于指数生长期时用2.5g／L的胰 南京医科人学硕十学位论文酶消化细胞，用完全 1640培养液稀释细胞，计数后接种于 6孔细胞培养板，培养24 h待细胞贴壁生长后弃去培养液，改用无血清的1640培养液（不全 1640培养液）培养 12 h后；每孔加入一定量的 rIGFJ至终浓度为 20 ＂g／ml，按 0、入 4、8、16 h不同的时问点收集细月轧淋巴细胞采用 RPMI 1640＋4％N“AB”血清直接培养于 6孔培养板，培养 24 h后弃去培养液，改用不全 1640培养液，培养 12 h后同样加N rIGFJ至每孔中终浓度为 20 ng加l，按上述相同的时间点收集兰胞。实验同时设不力。rIGF－I白 空白对照，在才同的 日 间点d 集细胞。细胞收集后用 Tripure提取 NA，以细胞内表达恒定的天冬氨酞合成酶基固（＊幻作为内参照，采用一步法RT七＊R试剂盒同时扩增AS和mFJ 基困。扩增产物于 2y琼脂糖凝胶电泳，摄像后采用Kodak凝胶图象分析软件分析两者表达强度，利用公式积分光密度（10m IGF．IR／10DAS对 1＊＊ IR＊RNA进行才对定量。，实验第二吾分按第一部分相同的方法培养淋巳细胞和AS“9细胞，按终浓度为0、5、20、80、160、320 ng／ml各刁加入才应的 rIGF，并根据第一部分实验结果确定的最佳作用时间点收集细胞，提取RNA，进行RTICR基固扩增定量分析观察不同浓度 rIGFJ作用对淋巴细胞和A549卓月各自 IGF mRNA表达的影响。 【结果11．淋巴细胞和AS叩细胞在撤除血清的无血清培养液中培养后＊F－IR m叫A的转录均呈反应性上调，至血清撤除 16 h后这种作用达到平台期。血清撤除刺激可以上调淋巴细胞IGF．IRmRNRNA的转录至 4倍于基础水平，而对于 A549细胞，这种作用可以使其IGF－IR mRNA升高至2倍于其基础水平。2．rIGF的作用迅速，20 ng／ml的 rIGF－I作用 8 h后 gF V kX下调淋巴细胞IGFJ m叫A至接近于基础水平。3．i血清培养的 A549 f邮胞与20 ng／ml的 rIGF－I乡 育 16 h后，其mF－IR m叫A的转录与无 rIGF－ I作用的空白对照相比无明显改变。4．淋巴细胞和 A549细胞被不 3 南京医科人学硕十学位论义同浓度的 rlGFJ的作用后出现不同的反应。对淋巴细胞而言，其IGF－IR m删A对rlGF－I的反应呈齐量负寸关，当 rIGF－I浓度增力。至 20 ng／ml后，IGF－IR mMA耳出现显著降低。而 A549兰胞IGF mRNA的转录水平贝与 IGF的刺激无明显才关性，即使rIGFJ的浓度增加至320 ＂g／ml，其瞩FJ m伽A的转录水平仍未发生明显改变。 ［结论］1．rIGFJ不能上调 A549细胞自身受体的表达，说明对于A549兰胞，1日F－1并非引起其自身IGF－IR过度表达的一个因素。2．淋巴细胞可以通过负反馈调节机制在转录水平下调细胞IGF－1受体的表达来对抗过度rIGF的刺激。3．A549细胞被过量的 rIGF刺激后，其＊F－IR mMA的转录表现为无反应性，说明在转录水平，A549细胞存在某种机制使互GFJ受体已逃避了这种自身负反馈调节，证明IG卜1受体在肿瘤细胞恶性转化和增殖过程中具有重要的意义。4．rIGF－I主要通过与细胞表面自身受体结合来发挥作用；当 rIGF－I6勺来激达 20 ng／ml或以上时，细胞表面白勺mF－IR已被过度的 rIGF－l所饱和，因而正常细胞 IGF m删A的转录不再有明显的变化。5．因血清撤除而引起的饥饿反应可以上调正常细胞 IGF－IR mRNA的转录，它也可以在转录水平