维药古丽娜,是维吾尔族一种常用药材,一般称为石榴花,来源于石榴科石榴属植物石榴Punica granatum L.的干燥花瓣。维吾尔族医学用于治疗神经衰弱、退翳和恶心;中医外用于治疗出血不止、口舌生疮、脱肛痔疮、口臭牙疼和皮肤瘙痒等疾病;石榴花具有消炎止血之功效,可用于治疗化脓性中耳炎。我国主产于新疆叶城、河南新乡、山东枣庄、安徽怀远、云南等地。石榴花在5,6月会连开3次花,且大多数二花及三花会自然脱落,故其资源相当丰富。现代研究表明石榴花中有效成分以多酚类、黄酮类为主,主要存在部位为乙酸乙酯和正丁醇部位。目前,对石榴的叶和果实的化学成分研究较多,而花的化学物质基础报道甚少。在课题组前期对乙酸乙酯部分进行研究的基础上进一步研究石榴花的有效成分,本研究对石榴花正丁醇和石油醚部位提取物进行分离纯化与鉴定。并对石榴花中7个多酚和黄酮类单体化合物进行抗炎活性测定。目的:本研究主要包括以下两个方面:1.研究石榴花中化学成分,旨在发现可能的新化合物和探明石榴花的物质基础。2.利用脂多糖诱导RAW264.7细胞建立体外炎症模型,细胞造模成功后,给予石榴花中7个多酚和黄酮类单体化合物,以NO抑制率作抗炎活性指标,筛选抗炎活性成分。方法:本实验采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、ODS柱色谱和半制备液相,重结晶等方法对石榴花正丁醇和石油醚部位提取物进行分离纯化,并利用NMR等现代波谱技术,结合参考文献确定化合物的化学结构;另取石榴花7个单体化合物:β-1,4,6-三-O-没食子酰基葡萄糖、butylbrevifolin carboxylate、短叶苏木酚酸甲酯、柯里拉京、三粒小麦黄酮、鞣花酸和8-甲雷杜辛,运用MTT法和CCK-8法检测7个单体的细胞毒性,并通过微板法检测NO的抑制率,进行化合物的抗炎活性研究。结果:从石榴花乙醇提取物的石油醚、正丁醇萃取部位分离鉴定出20个化合物,分别为β-1,4,6-三-O-没食子酰基葡萄糖(1),butylbrevifolin carboxylate(2),短叶苏木酚酸甲酯(3),短叶苏木酚(4),β-1,6-二-O-没食子酰基葡萄糖(5),鞣花酸(6),鹰嘴豆芽素A(7),retusin-8-methylether(8),蒲公英赛醇(9),谷甾醇(10),β-谷甾醇棕榈酸酯(11),crispin A(12),刺芒柄花素(13),三粒小麦黄酮(14),D-半乳糖醇(15),蒲公英赛酮(16),没食子酸(17),胡萝卜苷(18),β-谷甾醇(19),熊果酸(20);抗炎实验研究发现只有化合物柯里拉京抑制RAW264.7细胞生长,有细胞毒性。化合物butylbrevifolin carboxylate、短叶苏木酚酸甲酯、三粒小麦黄酮、鞣花酸和8-甲雷杜辛对脂多糖刺激RAW264.7细胞合成NO有抑制作用,具有不同程度的抗炎活性。结论:本实验初步探索了石榴花正丁醇和石油醚部位化学成分组成,共分离鉴定出20个单体化合物,其中化合物1~3和7~12是首次从该属植物中分离得到,化合物4是首次从石榴花中分离得到。石榴花中多酚化合物butylbrevifolin carboxylate、短叶苏木酚酸甲酯、鞣花酸,黄酮类化合物三粒小麦黄酮和8-甲雷杜辛有抗炎作用,为石榴花的抗炎活性物质。本实验对石榴花中所分到的7个化合物进行抗炎活性成分筛选,对于其它已知化学成分,也可进行抗炎活性研究。且对于体外抗炎实验,目前仅对NO这一个指标进行测定,后续还可根据现有数据,运用ELISA试剂检测更多指标,如I L-6、TNF-α、INF-γ、IL-1β,还可采用实时定量PCR检测mRNA水平,来明确石榴花抗炎机制。本实验从石榴花中首次分离得到10个化合物,且对首分化合物β-1,4,6-三-O-没食子酰基葡萄糖、butylbrevifolin carboxylate和短叶苏木酚酸甲酯进行体外抗炎活性研究。研究发现butylbrevifolin carboxylate和短叶苏木酚酸甲酯能够抑制细胞内NO的合成,具有抗炎作用。因此本实验为石榴花物质基础和药理作用奠定理论基础,同时对其下一步开发应用提供参考依据。