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目的 通过观察游离脂肪酸(free fatty acids，FFAs)对体外培养SD乳鼠胰岛细胞分泌功能的影响及软脂酸(Palmitic acid，PA)诱导的体外培养SD乳鼠胰岛细胞凋亡作用的实验研究，探讨游离脂肪酸对体外培养SD乳鼠胰岛细胞的毒性作用及可能机制，为阐述2型糖尿病的发生机制和防治方法的研究提供部分实验依据。 方法 1、以SD乳鼠胰岛细胞为对象，胶原酶分次短时间消化胰腺组织，细胞接种18h后转板继续培养，放射免疫法检测培养液中胰岛素及葡萄糖刺激下的胰岛素分泌量；胰岛细胞活体染色及免疫组化染色等方法进行胰岛细胞生物学活性鉴定；倒置显微镜下动态观察胰岛细胞生长情况。2、不同浓度的FFAs(PA、OA和AA)作用体外单层培养的SD乳鼠胰岛细胞48 h，软脂酸(PA)0.25 mmol/L作用胰岛细胞0、24 h、48 h、72 h后，放射免疫法检测各组细胞胰岛素分泌量的变化，倒置显微镜观察对照组和处理组细胞形态的改变。3、采用Hoechst33342/PI双染法，电镜观测、DNA片断化检测、Western-blot蛋白质测定等方法，观察软脂酸(PA)诱导的胰岛细胞凋亡的形态学改变和生化特点。 结果 1、胶原酶对胰腺组织进行分次短时间消化，细胞接种18 h后转板继续培养，DTZ染色胰岛细胞比例为70％，台盼兰染色细胞活力90％以上，成纤维细胞较少，培养7-11天的细胞分泌功能正常。2、不同浓度FFAs作用胰岛细胞48 h，低糖(2.8 mmol/L)刺激下的各组胰岛素分泌量无显著性差异(P＞0.05)；高糖(27.8mmol/L)刺激下0.25mmol/L、0.5 mmol/L PA、OA组胰岛素分泌量显著减少(P＜0.05)，而0.125 mmol/L PA、OA组胰岛素分泌量无显著降低(P＞0.05)；低糖及高糖刺激下AA各浓度组胰岛素分泌量无显著减少(P＞0.05)；组间比较，高糖刺激下0．5ml几PA组与相同条件下0．5mI几OA组胰岛素分泌量相比显著减少p＜0刀5人 0．25 tnmliL PA作用胰岛细胞不同时间门、24 h、48 h、72 h）动态观察结果显示，PA作用胰岛细胞48 h后，高糖刺激下的胰岛素释放量显著降低（P＜0．05）。3、不同浓度PA作用胰岛细胞48 h，Hoechst 33342仔I双染荧光显微镜下观察结果：部分细胞核呈兰色，可见核碎裂，提示为早期凋亡细胞；部分细胞核为红色，可见核碎裂及凋亡小体，提示为晚期凋亡细胞；部分细胞核均匀红色或为弥散红色，提示为死亡细胞。电镜观察到 PA 0．25rnmo讥、0．5 nunoliL组细胞核染色质边集，固缩、凝结成块，部分细胞核崩解、碎裂，胞质内大量空泡变性，可见自噬体、多胞体，细胞器超微结构紊乱；PA 0．25 nunol／L、0．5 mrnoMi组琼脂糖凝胶电泳图呈典型的 DNA梯状（ladder）带。Western－blot蛋白质检测 Be 12表达水平降低，而Bax表达水平增加。 结论1、用胶原酶反复短时间消化胰腺组织、细胞接种后及时转板的方法可获得纯度较高、生长良好、适合实验研究的胰岛单层细胞。2、游离脂肪酸对体外培养的SD乳鼠胰岛细胞的分泌功能有一定的影响，影响程度与FFAS的种类、浓度及作用时间有关。表现为PA、OA抑制高糖刺激下的胰岛素分泌，并且这种抑制作用随浓度增加而加强，呈剂量依赖性；PA的抑制作用强度大于OA；AA在一定范围D～20umoVL）内对胰岛细胞的分泌功能无影响。3、软脂酸（PA）可诱导体外培养的SD乳鼠胰岛细胞凋亡，凋亡程度与PA浓度有关，呈剂量依赖性。