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[目的] 感染性疾病是危胁人类健康的主要疾病之一,革兰阴性杆菌是临床常见的致病菌。内毒素(endotoxin)/脂多糖(LPS)是革兰阴性杆菌细胞壁的重要结构成分和致病因子,革兰阴性杆菌感染时,可出现内毒素血症,严重时可并发急性呼吸窘迫综合症(ARDS)、多器官功能衰竭(MOF),死亡率很高。目前无针对内毒素的特效治疗。内毒素耐受指接受小剂量内毒素刺激后形成的对大剂量内毒素呈低反应或无反应的现象,其特征是单核/巨噬细胞产促炎症细胞因子能力下降。已有的实验证明内毒素耐受时,内毒素引起的肺部肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞因子诱导的中性粒细胞趋化物(CINC)高表达、核因子κB(NF-κB)核转位以及肺部炎症反应等情况减轻,然而肺部抑炎症细胞因子的表达方面的研究仍较少;另外,有学者提出内毒素耐受时的低细胞因子表达可能会降低机体抵御病原体的能力,我们以往的实验观察到内毒素耐受大鼠在气管内接种铜绿假单胞菌后较正常大鼠肺部细菌负荷低、多形核中性粒细胞浸润少、肺部炎症反应明显轻,提示内毒素耐受状态下,抗病原体能力增强,其中的机制尚不清楚。天然免疫是抵御病原微生物的第一道防线,它在遭遇病原体时即刻应答,并且决定获得性免疫反应的类型和性质。树突状细胞(DCs)是天然免疫的重要细胞成分,它不仅有吞噬功能,同时也是迄今所知的抗原递呈能力最强的细胞,还通过分泌细胞因子调节获得性免疫,因而近年来认为DCs在控制感染中起着重要作用。本实验采用连续小剂量腹腔注射内毒素的方法建立内毒素耐受小鼠模型,用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测注射大剂量内毒素前和注射后6小时血清和肺组织中的IL-10的水平以评价内毒素耐受时抑炎症细胞因子的产生情况;从小鼠骨髓分离、培养DCs,检测内毒素耐受小鼠骨髓DCs对病原体成分葡聚糖的吞噬功能;检测内毒素耐受小鼠骨髓DCs表面协同刺激分子的表达,间接评价DCs的抗原呈递功能;采用ELISA检测内毒素耐受小鼠骨髓DCs培养液上清中IL-12的水平,和正常小鼠骨髓DCs对比分析,从而进一步明确内毒素耐受现象的本质,为其应用于临床防治感染性疾病提供实验室依据。[方法](1)清洁级健康雄性C57BL/10J小鼠,4～6w,随机分入内毒素耐受(endotoxintolerance,ET)组和正常对照(normal control,NC)组,各组按大剂量LPS刺激前(0h)、刺激后6h分为2亚组,n=5。ET组1.0 mg/kg/d LPS(Escherichiacoli 055:B5)连续腹腔注射4天复制内毒素耐受小鼠模型,NC组等量生理盐水腹腔注射4天。第5天腹腔注射10mg/kg LPS诱导炎症反应。(2)各组小鼠心内取血处死,取血清-20℃保存待测;取肺组织以0.5%triton X-100 PBS溶液(PH