七鳃鳗(Lampetra japonica)补体C3分子的cDNA片段克隆、表达以及多克隆抗体的制备

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补体C3分子是一类重要的免疫学分子。在免疫系统中,补体系统是重要的组成部分,补体系统中包含三条补体途径,分别是经典途径、旁路途径和甘露聚糖结合凝集素途径。在这三种补体途径中,补体c3分子是作为重要的交汇分子存在着。在抗原抗体复合物或病原体的刺激下,通过级联反应,活化补体C3,随后在靶细胞表面上形成膜攻击复合体,最终达到裂解靶细胞的目的。另外,补体C3分子及其裂解产物还有一系列调节免疫系统的功能。总体来说,补体C3分子在先天性免疫和适应性免疫系统中,都起着重要的作用。七鳃鳗作为无颌类脊椎动物的代表,进化地位处于无脊椎动物与脊椎动物之间,其独特的进化地位及其免疫系统一直受到免疫学家的关注。近年来,可变淋巴受体VLR的发现,揭示了在七鳃鳗体内含有特殊的适应性免疫系统。人们也发现了在七鳃鳗体内含有补体C3分子。但是,关于七鳃鳗体内的补体c3相关的免疫学功能,仍然尚不明确。为了研究七鳃鳗体内与补体C3分子相关的免疫系统的过程及特点,我们进行了七鳃鳗(Lampetra japonica)补体C3分子的基因cDNA的p链与α链的连接片段克隆、蛋白表达及蛋白纯化,进行抗补体c3的多克隆抗体的制备,为对于七鳃鳗补体c3分子相关的功能研究奠定了坚实的基础。在本文的研究过程中,作者通过PCR的方法扩增得到918bp的七鳃鳗补体C3cDNA片段,并成功的构建了补体C3分子原核表达载体。原核表达及重组蛋白纯化得到的较纯的C3片段蛋白免疫新西兰兔,兔血清经Protein G亲和纯化后获得兔抗C3多抗。利用兔抗C3多抗进行ELISA和Western blotting检测,ELISA检测抗体的效价为1:16万,Western blotting结果显示,纯化后的抗C3多抗可以特异的识别七鳃鳗血清中的补体C3分子。本论文通过对七鳃鳗抗补体c3多抗成功制备,为研究七鳃鳗基于补体C3的免疫系统提供了重要的工具。
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