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槭属(Acer L.)是槭树科(Aceraceae)植物,我国是世界上槭树分布种类最多的国家,是世界槭树的现代分布中心,拥有丰富的种质资源。但长期以来,关于槭属植物在分子标记上的亲缘关系的研究就相对较少,本研究将SRAP这种新的DNA分子标记运用到槭属植物的遗传多样性研究上,以期从DNA水平上明确槭属植物种间亲缘关系和分类地位,为槭属植物种质资源的科学利用提供依据。本试验以槭属植物的叶片为材料,通过对不同的DNA提取方法对比,探讨最佳的槭属植物DNA提取方法;同时对槭属植物的SRAP技术体系进行优化,并将该技术体系应用于22个槭属植物材料的SRAP扩增分析中。本试验研究结果如下:1.本试验采用常规CTAB法和改良CTAB法两种方法对槭属植物叶片DNA提取结果进行对比,采用常规的CTAB法所得的DNA量很少、DNA带弱、点样孔中有蛋白质存在、拖带现象也较严重,且DNA完整性差,在后期进行SRAP扩增时,杂质导致扩增不稳定或者扩增失败。而采用改良CTAB方法提取的条带很整齐、DNA质量较高、蛋白质少、无拖带现象、基因组完整性比较好。使用改良CTAB提取法有效地解决了槭属植物基因组总DNA提取中的褐变和多酚、多糖和蛋白质等次生物质干扰等问题。从检测所得纯度可知该DNA模板完全可以用于SRAP分析;另外,该方法还具有成本低、操作简单、省时等特点。2.优化建立了适用于槭属植物DNA分析的SRAP技术体系本试验以槭属植物基因组DNA为模板,通过Mg2+、dNTPs、Primer、DNA与Taq polymerase进行梯度试验,对槭属植物SRAP反应体系进行优化,建立了适合于槭属植物的SRAP-PCR反应体系,该体系总体积为25μL:Mg2+ 2.5 mmol·L ,dNTPs 0.25 mmol·L-,Primer 80 ng,Taq polymerase 1.5 U,DNA 40 ng。SRAP-PCR优化反应程序为:94℃变性5 min;94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环;94℃变性1 min,50℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸5 min;4℃保存。结果表明该体系和程序可满足槭属植物基因组SRAP扩增的要求。3.多态性引物对筛选利用优化后的反应体系和程序,从64个引物对中筛选出重复性好的、谱带清晰稳定的引物对24对。每个引物对产生扩增谱带4～13条,共产生扩增谱带169条,平均每个引物对产生谱带7.04条。其中每个引物对产生多态性谱带3～10条,共产生多态性谱带107条,平均每个引物对产生多态性谱带4.46条。每个引物对的多态性比率在54%～83%之间,平均每个引物对的多态性比率为63%。4.用筛选出的部分引物对22个槭属植物的DNA模板进行SRAP扩增,得到了稳定的SRAP谱带。这些引物对各种材料扩增所得到的特征谱带反映了基因组总DNA碱基序列的特异性,表明这些引物可用于其他分析。5.采用遗传距离和UPGMA法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图。在遗传距离(D)3.32处,将22份供试材料分为五类,其下又有较多分支。聚类在同一组里的有不同组的槭属植物样品,而在同一组的槭属植物又有的不能聚在一起。结果表明, SRAP对基因组的分析结果与传统分类学的结果基本一致。但有些种的归属及种间关系存在较大变化差异,因此对其亲缘关系有待于进一步研究。