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研究目的肿瘤因其高发病率和高死亡率,目前已经成为威胁人类生命健康的主要病因。但传统的治疗肿瘤的方法非常有限,主要包括手术、化疗和放疗。其中化疗主要是通过化疗药物杀伤或抑制肿瘤细胞达到治疗肿瘤的目的,但是化疗药物同时对正常组织或器官也产生损害或毒性作用。因此开发特异地靶向肿瘤细胞的化疗药物已迫在眉睫。粉防己碱(tetrandrine)是一类主要存在于防己科植物块根中的双苄基异喹啉生物碱,研究显示粉防己碱具有抗肿瘤作用。H1是由四川大学王锋鹏教授在粉防己碱的基础上合成的一种新型的衍生物,因其在结构上进行了一定的优化,所以H1具有更好的抗肿瘤效果。本篇论文旨在研究H1对人非小细胞肺癌细胞凋亡和自噬的影响并进一步阐明其分子机制。研究方法1.肿瘤细胞培养2.磺酰罗丹明B (SRB)比色法检测肿瘤细胞增殖3. Western Blot实验检测细胞内蛋白水平的变化4.流式细胞术检测细胞凋亡5.RNA干扰抑制相关基因的表达6.在荧光显微镜下采用EGFP-LC3B融合蛋白来示踪自噬的发生研究成果新型粉防己碱衍生物H1诱导人非小细胞肺癌细胞凋亡的研究1.H1抑制A549、Calu-1、H1792、H157、H460这五种人非小细胞肺癌细胞的增殖,并且呈现浓度依赖性。2.H1激活Calu-1、A549、H1792细胞中的凋亡蛋白酶caspase级联反应。3.H1上调Calu-1、A549、H1792细胞中死亡受体DR5的表达,KnockdownDR5保护细胞免于H1诱导的细胞凋亡。4.H1激活Calu-1、A549、H1792细胞中内质网应激,上调CHOP的表达。5.在Calu-1、A549、H1792细胞中Knockdown CHOP,抑制H1上调DR5,进而抑制H1诱导的细胞凋亡。6.H1下调Calu-1、A549、H1792细胞中的c-FLIP蛋白水平,过表达c-FLIP保护细胞免于H1诱导的细胞凋亡。新型粉防己碱衍生物H1诱导肺癌细胞自噬的研究1.H1上调Calu-1、A549、H1792细胞中的MAP1LC3B-Ⅱ。2.H1诱导Calu-1-EGFP-MAP1LC3B细胞发生荧光聚集。3.在Calu-1细胞中,Knockdown ATG5或ATG7抑制H1诱导的MAP1LC3B-Ⅱ上调。4.在Calu-1-EGFP-MAP1LC3B细胞中,Knockdown ATG5或ATG7抑制H1诱导的荧光聚集。5.自噬抑制剂LY294002和E64d有效的抑制了H1诱导的自噬。6.在Calu-1细胞中,Knockdown ATG5或ATG7促进H1诱导的细胞凋亡。结论1.H1诱导人非小细胞肺癌细胞凋亡进而达到抗肿瘤目的；2.H1激活ER stress,通过诱导CHOP上调继而上调DR5的表达最终诱导细胞凋亡；3.抗凋亡蛋白c-FLIP参与H1诱导的肺癌细胞凋亡；4. H1诱导人非小细胞肺癌细胞发生自噬；5.在人非小细胞肺癌细胞中,抑制H1诱导的自噬增强H1诱导的细胞凋亡。综上所述,我们发现H1通过诱导人非小细胞肺癌细胞发生凋亡进而达到抗肿瘤目的。并且进一步阐述了H1诱导细胞凋亡的分子机制。H1通过激活内质网应激,上调连接内质网应激与细胞凋亡的关键分子CHOP,进而诱导死亡受体DR5的上调,最终诱导细胞凋亡。此外抗凋亡蛋白c-FLIP也参与了H1诱导的肺癌细胞凋亡。同时我们发现H1诱导人非小细胞肺癌细胞发生自噬,抑制H1诱导的细胞自噬可以促进H1诱导的细胞凋亡。