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目的探讨let-7b在人类肝细胞癌中的生物学活性,并尝试寻找其中潜在的信号转导通路。方法本实验选用从美国模式培养物集存库(American Type Culture Collection,ATCC)购买的Hep G2人肝癌细胞作为研究对象。为了探讨let-7b表达水平的高低在肝细胞癌发展中的重要调控作用,采用RNA的提取和实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测let-7b在HCC细胞和非癌性细胞中的表达水平。为了明确let-7b是否可以体外抑制Hep G2细胞的增殖,应用慢病毒转染技术,设置感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50,将let-7b转染入Hep G2细胞中。实验分为三组,分别是感染了携带let-7b的慢病毒(lentiviral let-7b LV-let-7b)的Hep G2组(Hep G2-let-7b)作为实验组、转染了空白的慢病毒载体(lentiviral vector,LV-VC)的Hep G2组(Hep G2-VC)作为阴性对照组、无病毒感染的Hep G2细胞(Hep G2-BC)作为空白对照组,首先检测各组let-7b的表达水平,并应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒和克隆形成技术来检测细胞增殖能力。为了探讨let-7b对Wnt/β-连环蛋白信号通路的作用。实验分为三组,分别为Hep G2-let-7b作为实验组、感染了可控的mi RNA(control micro RNA,con-mi R)的Hep G2细胞(Hep G2-con-mi R)作为阴性对照组、Hep G2-BC作为空白对照组,应用双荧光素酶报告基因检测系统及蛋白印迹分析测定比较三组Wnt/β-连环蛋白信号通路活性及β-catenin、c-Myc、E-cadherin的表达水平。为了探讨Wnt/β-catenin信号通路对于HCC细胞增殖的影响,将加入let-7b抑制剂的LV-let-7b的Hep G2组(Hep G2-let-7b inhibitor)和加入Wnt/β-连环蛋白通路抑制剂1(WNT inhibitory factor 1,WIF1)阻断Wnt/β-连环蛋白活性的Hep G2组(Hep G2-WIF1)作为实验组,无病毒感染的Hep G2作为空白对照组,应用CCK-8试剂盒及克隆形成技术检测细胞增殖能力。结果研究样本共包括19个肝细胞癌组织样本和15个非癌性组织样本,实验结果显示let-7b在HCC组织中的表达水平相对非癌性组织来说下调了大概2.1倍(P<0.05)。细胞增殖是随着时间的推移细胞的数量不断增加的过程,与Hep G2-VC和Hep G2-BC组相比较,从第2天到第5天,Hep G2-let-7b组的Hep G2细胞增殖能力降低(P<0.05)。此外,相对于Hep G2-BC组,Hep G2-let-7b组的Hep G2细胞集落的数量是减少的,而Hep G2-anti-let-7b组Hep G2的细胞集落数量是增加的。我们监测了let-7b对Wnt/β-连环蛋白信号通路的活性及通路中所含成分的影响。与Hep G2-con-mi R相比,Let-7b过表达显著下调了Wnt/β-连环蛋白信号通路的活性及β-catenin,c-Myc的蛋白表达水平,但上调了E-cadherin的蛋白表达水平(P<0.05)。与Hep G2-BC组相比,从第2天到第5天,Hep G2-WIF1组的细胞增殖被显著抑制,WIF1也显著阻断了由let-7b inhibitor引起的Hep G2增殖的增加(P<0.05)。此外,在用WIF1抑制Wnt/β-连环蛋白后,Hep G2细胞的集落数下降。结论1 Let-7b表达水平的高低在肝细胞癌发展中的重要调控作用。2 Let-7b可以体外抑制Hep G2细胞的增殖。3 Wnt/β-catenin信号通路对于Hep G2细胞增殖起到至关重要的作用。4 Let-7b是以Wnt/β-catenin信号通路为靶点对肝细胞癌细胞产生作用。图11幅;表3个;参134篇。