湘蕾金银花离体培养与植株再生研究

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湘蕾金银花的原植物为灰毡毛忍冬[Lonicera macranthoides Hand. Mazz),是1997年从灰毡毛忍冬自然变异株选育出来的系列品种。其中尤其是“湘蕾五号花王(俗称花王)”具有花始终成花蕾状,花冠整齐,花呈青绿色,花密集,多分枝,树型发达,花期长,含绿原酸高等特点,在湖南的隆回、溆浦等地特别受欢迎。扦插和嫁接的繁殖系数和繁殖速度都有限,而现有的灰毡毛忍冬离体组培技术增殖系数低,难以满足市场上对其优质种苗的需求。研究选用了综合性状优良,高绿原酸含量的“湘蕾五号花王”为材料。选其茎段、叶柄、叶片为外植体,对其离体培养和植株再生进行了研究,以期为湘蕾金银花的种质创新、品种改良及遗传转化等研究奠定基础。其主要研究结果如下:1.研究中较好的灭菌方法是:选取生长旺季的一年生嫩梢,冷藏处理7天后,放入75%酒精中浸泡15-20s,再用0.1%的升汞处理12min,接种20天后,其污染率为13.3%,成活率为76.7%,比1%次氯酸钠处理下高8.9%。2.茎段、叶柄、叶片在配方为MS+NAA1.0mg/L的培养基中愈伤组织的诱导率高于其他培养基。其中以叶柄作为外植体的诱导率最高,为81.3%;其次是叶片,诱导率为76.9%;茎段最差,诱导率为68.4%。3.而较适宜的愈伤组织分化配方为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L,培养30d后分化率为75.6%。较适宜的不定芽增值配方为MS+6-BA1.0mg/L培养基中,培养20d后增值倍数达到6倍左右。4.较适宜的生根配方为1/2MS+IB A0.2mg/L+NAA0.2mg/L,培养40d后生根率为76.7%。将组培苗置于珍珠岩中炼苗15天后,成活率较高,为77.8%,移栽后成活率可达100%。5.通过不同光质对愈伤组织的诱导和分化、不定芽的增值以及生根的作用,发现在白光下的效果都优于黑暗、红光和蓝光。白光相比黑暗、红光和蓝光,茎段和叶柄愈伤组织的平均诱导率分别高了4.0%、17.8%、25.5%,愈伤组织的分化率分别高了24.4%、12.2%、17.8%,不定芽的增值倍数分别提高了6倍、3倍、3倍,生根率分别提高了37.8%、5.6%、4.5%。
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