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细菌Ⅵ型分泌系统(T6SS)广泛存在于革兰氏阴性菌中,是近年来发现的具有多种功能的新型分泌系统。目前研究发现T6SS参与了致病菌侵染宿主,生物膜的形成,细菌间的相互作用,抗环境胁迫反应及群体感应等一系列生命活动,因此,T6SS复杂的功能可帮助细菌适应多变的生存环境。罗尔斯通氏菌(Cupriavidus necator JMP134)作为环境友好型微生物,最初对于它的研究仅限于苯代污染物的降解和PHB的合成。经过基因组比对分析,发现在Cupriavidus necator JMP134中存在着两套T6SS,到目前为止尚没有关于Cupriavidus necator JMP134中T6SS相关功能的报道。本实验以Cupriavidus necator JMP134中第一套Ⅵ型分泌系统(T6SS1)为研究对象,对其功能及其调控进行了研究。具体的研究成果如下:1.构建了Cupriavidus necator JMP134中T6SS1核心保守基因clpV(reut_A1727)缺陷突变株。通过比较野生型和突变体之间在盐、酸、氧化剂等多种胁迫下的存活率的差异,发现在氧化剂胁迫下野生株的存活率明显高于突变株,说明该套分泌系统与抗氧化功能相关。2.通过蛋白质序列比对,找到了Cupriavidus necator JMP134中oxyR的同源基因reut_A2805,构建了此基因的突变株,比较在氧化胁迫下突变株与野生株之间的存活率差异,发现野生株存活率显著高于突变株,推测此基因可能参与了对T6SS1的调控。3.对T6SS1启动子分析,发现了Reut_A2805蛋白可能的结合位点,EMSA实验表明Cupriavidus necator JMP134中Reut_A2805蛋白可直接结合在T6SS1启动子上。通过启动子酶活检测、RT-PCR以及Hcp1的分泌检测等实验研究Reut_A2805对T6SS1的调控作用,研究结果显示Reut_A2805正调控T6SS1。综上所述,本研究通过对Cupriavidus necator JMP134菌株T6SS1的抗氧化胁迫功能的研究,认为Cupriavidus necator JMP134在受到氧化胁迫时,T6SS1的调节因子Reut_A2805蛋白可结合在T6SS1启动子上,上调T6SS1的表达,从而减少自身受到的氧化损伤。