利用光遗传学技术进行心脏起搏及除颤的在体实验研究

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目的:探讨利用光遗传学技术的光电转换特性能否实现大鼠的在体光起搏及除颤,并进一步探究光照功率密度、脉冲宽度、光照部位对光起搏及除颤成功率的影响。方法:27只幼年期SD大鼠按随机数字表法随机均分为三组:Ch R2组、空载病毒组、正常组,每组9只。经右侧颈静脉给各组大鼠分别注射60μl的载有光敏感蛋白基因Ch R2(H134R)的腺相关病毒[AAV9-CAG-h Ch R2(H134R)-m Cherry],空载病毒(AAV9-CAG-m Cherry),PBS(Phosphate Buffered Saline)。清洁级屏障环境饲养至成年(8周),麻醉后气管插管并开胸,充分暴露心脏。设置Labchart参数并调节473nm激光器功率旋钮,给予高于心脏自主节律的蓝光脉冲照射右心室起搏心脏。改变光照功率密度(0.03~1.97mw/mm~2)、脉冲波宽(2、5、10、20、50ms)和光照部位(右心房、左心室、右心室、室间隔、心尖部),同步记录光照输出信号和体表心电图,观察并统计光照右心室的起搏情况。结扎左冠状动脉前降支制备急性心肌梗死模型,burst刺激诱发室颤/室速。室颤/室速持续5s时,分别在左心室非梗死区、右心室和心尖部给予功率密度为2倍起搏阈值、持续时间为1s的蓝色光照进行除颤。光照结束2s内室颤/室速停止定义为除颤成功,记录并统计每个部位的除颤率。结果:颈静脉注射操作完成8周后,所有SD大鼠心脏有效表达Ch R2(H134R)且生长发育及心电图参数均未见明显异常,并且完成光起搏实验过程。随机选择其中5只大鼠完成急性心肌梗死模型的制备,进行室颤/室速的诱发及光照除颤。473nm蓝光脉冲参数设置为功率密度0.64mw/mm~2,脉冲宽度20ms,频率5Hz,光照右心房、左心室、右心室、室间隔、心尖部均能实现1:1起搏。(1)固定脉冲宽度20ms、频率8Hz,473nm蓝光光照右心室,光照功率密度在0.03~0.64mw/mm~2范围内,心脏夺获率随功率密度的增加而增大,最终达100%。(2)不同脉冲宽度(2、5、10、20、50ms)的8Hz蓝光光照右心室,完全起搏心脏所需的最小功率密度依次为0.46±0.33,0.26±0.10,0.18±0.04,0.13±0.04,0.16±0.07mw/mm~2。Ch R2组大鼠接受功率密度为2倍起搏阈值的光照前后,心率HR、QT间期、QRS波宽均无统计学差异(P均>0.05)。(3)功率密度为2倍起搏阈值,持续时间为1 s的蓝光脉冲在左心室非梗死区、右心室和心尖部的除颤率依次为60±22.36%、70±27.39%、100%。结论:473 nm蓝光脉冲光照心脏能够实现光起搏,持续光照心脏能够实现光除颤;起搏成功率与光照功率密度、脉冲宽度有关;除颤成功率与光照部位有关。
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