【摘 要】
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目的:研究柚皮苷对D-半乳糖所致成骨细胞损伤的拮抗作用,并进一步探讨其可能的分子机制。方法:（1）以不同浓度的 D-半乳糖（0mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL）体外培养MC3T3-E1小鼠成骨细胞24h,用CCK-8法检测细胞活性。选择以20mg/mL浓度的D-半乳糖体外培养MC3T3-E1小鼠成骨细胞,分别培养24h、36h、72h,用CCK-8法检测细
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目的:研究柚皮苷对D-半乳糖所致成骨细胞损伤的拮抗作用,并进一步探讨其可能的分子机制。方法:（1）以不同浓度的 D-半乳糖（0mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL）体外培养MC3T3-E1小鼠成骨细胞24h,用CCK-8法检测细胞活性。选择以20mg/mL浓度的D-半乳糖体外培养MC3T3-E1小鼠成骨细胞,分别培养24h、36h、72h,用CCK-8法检测细胞活性。筛选合适的干预条件建立D-半乳糖诱导MC3T3-E1小鼠成骨细胞损伤模型。（2）以不同浓度的柚皮苷（0、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L）体外培养MC3T3-E1小鼠成骨细胞,分别培养24h、36h和48h,用CCK-8法检测细胞活性,筛选合适的药物试验条件。（3）以终浓度为20mg/mL的D-半乳糖构建D-半乳糖诱导成骨细胞损伤模型,以不予柚皮苷干预为对照组,以终浓度为10-6mol/L、10-7mol/L柚皮苷干预为用药组,培养48小时,用CCK-8法检测细胞活性分析柚皮苷对D-半乳糖损伤模型中成骨细胞活性的影响。（4）运用实时荧光定量PCR技术检测柚皮苷对D-半乳糖诱导损伤模型中成骨细胞 ALP mRNA、COL-I mRNA、RAGE mRNA、IL-6mRNA 表达的影响结果:（1）培养24小时,随着D-半乳糖浓度（0、10、20、30、40mg/mL）的升高,MC3T3-E1小鼠成骨细胞活性下降。浓度为20mg/mL的D-半乳糖对成骨细胞活性的抑制作用在24h、36h、48h时间范围内呈现出时间依赖性。（2）各个浓度（0、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mol/L）的柚皮苷在培养 24h 后均未表现出对成骨细胞活性的影响。终浓度为10-6、10-7mol/L浓度的柚皮苷在培养36h、48h后表现出显著提高成骨细胞活性作用,且随着时间延长而更加显著。浓度10-4mol/L的柚皮苷在培养36h、48h后表现出对成骨细胞活性的显著遏制作用。（3）培养48h后,终浓度为10-6mol/L柚皮苷能够显著改善20mg/mL的D-半乳糖对MC3T3-E1小鼠成骨细胞的活性抑制作用。（4）以浓度为20mg/mL的D-半乳糖体外培养MC3T3-E1小鼠成骨细胞建立成骨细胞损伤模型。PCR检测结果显示D-半乳糖诱导损伤模型组中ALP mRNA和COL-I mRNA的表达下调,RAGE mRNA和IL-6mRNA表达显著上调。在模型组基础上以终浓度为10-6mol/L的柚皮苷共培养48h,逆转了 ALP mRNA表达水平的下降,显著下调RAGE mRNA和IL-6 mRNA的表达。结论终浓度为10-6mol/L的柚皮苷培养48h能够拮抗D-半乳糖造成的MC3T3-E1小鼠成骨细胞损伤。柚皮苷的这种保护作用可能是与上调成骨细胞ALP mRNA水平,下调RAGE mRNA、IL-6mRNA的表达有关。为中药活性单体防治骨质疏松症提供了新的见解和实验依据。
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