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阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)是一种危害较大的食源性致病菌,感染婴幼儿会导致其患菌血症、坏死性小肠结肠炎和脑膜炎。最近研究表明免疫功能低下的人,特别是老年人感染阪岐克罗诺杆菌可能引起腹泻,伤口感染和尿路感染,其污染后的快速溯源是减小危害损失的关键,但依据表型和血清型的传统分型方法,对于致病菌和非致病菌的分离有一定困难。PFGE技术对致病菌有较好的分型能力,通过分析菌株的全基因组DNA信息,从遗传物质基础上将致病菌及其亚型之间的差异表现出来,更加快速准确的对克罗诺杆菌判断并进行溯源,为危害预警及防控提供参考依据。本研究对分离于羊奶粉生产过程中各工序的共计34株的阪崎克罗诺杆菌基因分型进行探究,采用4种限制性内切酶对克罗诺杆菌进行脉冲电场电泳,为克罗诺杆菌PFGE分型提供了更多有用信息条带,提高了克罗诺杆菌PFGE的分型效果和可信度。同时采用了多位点序列分型技术(MLST)从基因层面上对克罗诺杆菌分型鉴定,对于菌株的遗传进化和种群结构分析更加准确精细。通过多种基因分型方法结合,可以对阪崎克罗诺杆菌污染爆发后进行快速溯源,同时对临床分离菌株致病性、毒力强弱与基因型之间的关系进行分析判断,为预警防控提供技术支撑。所得结论如下:(1)选用XbaⅠ、SpeⅠ、NheⅠ和BlnⅠ四种限制性内切酶对克罗诺杆菌进行脉冲场电泳,结果表明单酶酶切分型中,NheⅠ的分型效果最佳,其次为SpeⅠ,BlnⅠ,最后为XbaⅠ。在NheⅠ的分型中,酶切克罗诺杆菌可得到17~23条有效条带,将34株试验菌分为21个基因型,束菌株百分比、束平均数、Simpson指数与结与菌株比值分别为65%、2.44、0.966、0.82。(2)两种酶酶切分型中,NheⅠ/SpeⅠ分型效果最好,可以将34株试验菌分为22个基因型,束菌株百分比、束平均数、结与菌株比值、Simpson指数分别为56%、3.17、0.76、0.955。三种酶酶切分型中,XbaⅠ/SpeⅠ/NheⅠ分型效果最好,可以将34株试验菌分为25个基因型,束菌株百分比、束平均数、结与菌株比值、Simpson指数分别为38%、3.25、0.79、0.964。(3)四种酶结合分析得到的分型效果最佳,各项多样性指标均明显提高,产生27个基因型,束菌株百分比、束平均数、结与菌株比值、Simpson指数分别为32%、2.75、0.85、0.977,结果表明对菌株进行亚分型时,所使用限制酶的种类越多分型效果越好,结果更加准确。(4)使用ERIC-PCR方法对34株克罗诺杆菌进行扩增,对电泳图谱进行UPGMA聚类分析,以相似度系数90%作为区分基因型别的临界值,可将34试验菌分为13个基因型,多样性指标束平均数、束菌株百分比、结与菌株比值、Simpson指数分别为2.38、91%、0.32、0.910,该方法对克罗诺杆菌有较好的分辨力。(5)根据PFGE结果选取25株克罗诺杆菌进行MLST分型,共得到3种ST型,分析后得到聚类树和最小生成树,相同ST型的菌株其PFGE相似度系数在90%以上。