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目的采用Transwell小室筛选胃癌细胞高侵袭亚系并研究其生物学特性。旨在进一步探讨胃癌侵袭、转移机制。方法利用Transwell小室筛选高侵袭力胃癌细胞亚系。并通过HE染色观察母亚两系细胞形态;Western blot检测两系细胞E-cadherin和TIMP-1蛋白变化,并对各条带进行灰度分析;Transwell检测细胞迁移能力变化;用免疫组化SABC法观察母亚两系细胞NM23-H1蛋白表达情况并对其结果进行定性、定位及图象分析;流式细胞术检测细胞周期以及绘制细胞生长曲线。结果利用Transwell小室反复筛选十次,从MKN-28细胞中筛选出高侵袭力胃癌细胞亚系MKN-28S10。母亚两系细胞形态上无明显差异,细胞均呈多边形,大小不均,核浆比大,核圆形、椭圆形;但亚系中E-cadherin、TIMP-1蛋白表达同母系相比显著降低, MKN-28S10中E–cadherin蛋白表达的相对灰度值为0.42±0.03,较MKN-28细胞(相对灰度值为0.90±0.04)明显降低(P<0.05),而MKN-28S10的TIMP-1蛋白表达的相对灰度值(0.52±0..06)较MKN-28的TIMP-1蛋白表达(0.89±0.05)明显降低(P<0.05);免疫组织化学结果显示,亚系中NM23-H1的表达明显低于母系(P <0.05) ,亚系NM23-H1的平均光密度(71.81±18.81)较母系(127.12±15.68)明显降低(P <0.05);显微镜下细胞计数示亚系迁移至膜背面的数量(100.25±0.50/视野)较母系(61.75±2.06/视野)明显增多(P <0.05),细胞运动能力明显增强;细胞周期检测表明:MKN-28S10细胞S期细胞比例为66.7%,高于MKN-28细胞在此期的DNA相对含量。而且,亚系细胞增殖指数(PI)(74.6%)明显高于母系(64.8%);亚系体外生长速度快于母系。结论1.筛选出人胃癌细胞高侵袭亚系(MKN-28S10)2. MKN-28人胃癌细胞母亚两系侵袭潜能的不同与E-cadherin,TIMP-1,NM23-H1蛋白表达水平及肿瘤细胞的运动能力相关3.侵袭能力强的亚系(MKN-28S10)其体外增殖能力较母系(MKN-28)强