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目的肝细胞癌(HCC)是一种致死率极高的肿瘤,它与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染关系密切。由于从细胞、分子水平对肝细胞癌发病机制的研究还不太透彻,所以目前我们还缺乏治疗肝细胞癌的有效措施。因此,深入研究HCC的发病机制并找到新的治疗靶点对HCC的治疗至关重要。乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein, HBx)是由HBVX基因(hepatitis B virus X gene, HBX)编码的,它对HBV相关HCC的发生至关重要。Notch信号通路是高度保守的信号通路,依据肿瘤细胞类型及其它信号通路(如Wnt)的状态,Notch信号通路可能在肿瘤的不同阶段发挥相反的作用。我们前期的研究发现Notchl信号通路在HBx诱导的人非肿瘤肝细胞系L02的恶性转化过程中发挥了必不可少的作用。因此,本课题旨在研究Notchl与Wnt/β-catenin信号通路对HBx致HCC发生的作用,并且试图从细胞周期及凋亡调控以及Notchl与Wnt/β-catenin信号通路串话等不同角度探讨在此过程中两条信号通路的关系与作用机制,以期为肝癌的靶向治疗提供新思路。方法通过构建靶向Notchl基因的短发夹RNA(shRNA)重组质粒抑制L02/HBx细胞Notchl信号通路,观察其对细胞增殖及裸鼠体内成瘤的影响。应用流式细胞仪检测靶向抑制Notchl对L02/HBx细胞周期及凋亡的影响,并用定量RT-PCR及Western blot分别检测细胞周期及细胞凋亡相关调节因子的mRNA及蛋白表达水平。另外,用shRNA及过表达质粒的方法分别抑制和上调Wnt/β-catenin信号通路,用定量RT-PCR及Western blot法分别检测两条信号通路的关键分子及靶基因的表达,同时观察其对细胞增殖的影响。结果Notch1shRNA抑制L02/HBx细胞Notch1信号通路的活性,在体外抑制了细胞增殖及克隆形成,在体内明显抑制细胞在BALB/c裸鼠皮下的肿瘤形成。而且,阻断L02/HBx细胞的Notch1,能通过cyclingD1/CDK4通路,下调cyclinD1,CDK4,E2F1,上调p21和Rb,将细胞周期阻滞在G0/G1期,并且通过caspase-9-caspase-3途径,明显促进L02/HBx细胞的凋亡。另外,HBx能活化L02细胞的Notch1信号通路和Wnt/β-catenin信号通路,并引起肝细胞的恶性转化；抑制Notch1信号通路降低L02/HBx细胞中Wnt/β-catenin信号通路的活性,且抑制增殖;抑制Wnt/β-catenin信号通路也能明显抑制细胞增殖,但对Notch1信号通路没有明显的影响；抑制Notch1后上调Wnt/β-catenin信号通路能恢复因抑制Notch1对L02/HBx细胞增殖的抑制作用；而且,在此过程中,Wnt信号通路的膜受体Fzd10的表达水平与Wnt/βkcatenin信号通路的活性一致。结论这些结果提示Notch1信号通路通过cyclingD1/CDK4及caspase-9-caspase-3途径引起细胞周期与凋亡的紊乱,并且通过Fzd10激活Wnt/β-catenin信号通路,从而对乙肝病毒X蛋白致肝细胞癌的发生起了重要作用。因此,Notch1可能是HBx相关HCC的潜在的治疗靶点,但需要Wnt/β-catenin信号通路的协同起作用。