【摘 要】
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鳜(Siniperca chuatsi)是我国特有的淡水名贵鱼类,传染性脾肾坏死病(ISKN)在规模集约化养殖过程中常有发生,并伴随着极高的死亡率,因此,病毒病是制约鳜养殖产业发展的重要瓶颈。论文通过检测广东和长江中下游鳜鱼种、饵料鱼和野生鳜鱼的传染性脾肾坏死病毒(Infection spleen and kidney necrosis virus,IS KNV)携带率,对流行现状进行调查;同时,
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鳜(Siniperca chuatsi)是我国特有的淡水名贵鱼类,传染性脾肾坏死病(ISKN)在规模集约化养殖过程中常有发生,并伴随着极高的死亡率,因此,病毒病是制约鳜养殖产业发展的重要瓶颈。论文通过检测广东和长江中下游鳜鱼种、饵料鱼和野生鳜鱼的传染性脾肾坏死病毒(Infection spleen and kidney necrosis virus,IS KNV)携带率,对流行现状进行调查;同时,研究聚肌胞苷酸(Poly I:C)模拟病毒刺激对鳜血细胞、免疫因子活性及干扰素基因表达变化影响。研究结果为了解鳜ISKNV病毒流行现状和感染后免疫应答提供基础资料。主要研究结果如下:1.为掌握我国鳜传染性脾肾坏死病毒的流行状态,2017-2021年,收集了广东和长江中下游地区18个采集点的鳜鱼苗、饵料鱼和野生鳜鱼样本,采用巢式PC R技术进行ISKNV分子检测。结果表明,广东本地鳜鱼苗阳性率达55%,其中化州、中山阳性率有40%以上,惠州未检测出阳性,长江中下游地区鳜鱼苗阳性率达29%;广东本地鲮鱼阳性率达80%以上,长江本地饵料鱼中,除鲢检出率达90%,草鱼阳性检出率15%外,其余样本均为检出;长江中下游地区野生鳜中除上饶、扬中地区(90%,45%)较高外,赤壁、江夏、南京阳性率分别为15%、15%、20%,千岛湖未检出;长江中下游地区斑鳜苗种阳性率为10%,杂交鳜苗种未检出。长江中下游地区野生斑鳜、中国少鳞鳜未检测出。结果表明,ISKNV在鳜养殖主要产区有不同流行分布,不同地区分布情况有明显差异,为鳜鱼ISKNV病原调查与监测提供参考。2.为了解病毒入侵机体后血细胞和免疫因子的应答反应,采用聚肌胞苷酸(P oly I:C)模拟病毒刺激,比较了注射后不同时序(0h,3h,6h,12h,24h,36h,48h,72h)鳜白细胞组成百分比变化,结果显示,血液白细胞百分占比中,血栓细胞>单核细胞>淋巴细胞>嗜中性粒细胞,其中,处理组单核细胞百分占比6h始达极显著水平(P<0.01)后,在48h到达峰值后恢复初始,嗜中性粒细胞占比均有明显提升,淋巴细胞、血栓细胞占比均呈现下降趋势。双抗体夹心酶联免疫法检测显示,处理组血清补体蛋白3(C3)水平自3h高于初始与对照组差异显著(P<0.05),补体蛋白4(C4)水平无显著变化(P>0.05)。荧光PCR相对定量结果显示,处理组IRF7基因肾脏、肝脏、脾脏、胸腺表达均从3h、6h开始显著上调(P<0.01),且胸腺表达量最高;IFNh基因肾脏、肝脏、脾脏3h表达显著上调(P<0.01),其中胸腺6h达到最高峰值(P<0.01),12h后恢复下降;IFNc基因肾脏、胸腺、肝脏、脾脏12h表达量达到极显著水平(P<0.01)后逐渐下降。结果表明,鳜白细胞、免疫器官对Poly I:C刺激均有明显应答反应,为病原入侵过程中的细胞和分子应答模式研究提供基础依据。
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