论文部分内容阅读
胃癌（gastric cancer,GC）作为一种恶性肿瘤,病变起源于胃黏膜上皮,其发病率位居全球恶性肿瘤排名第四位。由于对该病的发病机制尚不清楚,临床上暂没有十分明确的治疗手段。研究报道致病原因与原癌基因和抑癌基因之间的平衡被打破有关联,使得原癌基因出现过度活化和体内抑癌基因被抑制失活,抑癌基因中的Gastrokine 2（GKN2）基因就参与胃癌的整个病程。体内的激酶JAK1（Janus kinases1,JAK1）和JAK2（Janus kinases2,JAK2）或其他细胞因子激活STAT3（signal transducers and activators of transcription3）,进而调控胃癌细胞的增殖、分化和凋亡等,但胃癌发生的具体的作用机制目前尚不明确。姜黄素（curcumin,Cur）是从姜科、天南星科中的一些植物的根茎中提取具有二酮的色素,为二酮类化合物。研究表明,姜黄素具有降血脂、抗肿瘤、抗炎、抗氧化等作用。姜黄素可能通过抑制JAK/STAT3信号通路和调节GKN2蛋白表达,进而影响胃癌细胞的增殖、凋亡,从而达到抗肿瘤作用。目的:研究姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和凋亡的影响及其相关作用机制。方法:一、首先将人胃癌SGC-7901细胞进行复苏,然后把细胞放入含有10%胎牛血清及1%双抗的DMEM培养基中培养,当细胞汇合度达到90%左右时进行消化、传代。将体外培养人胃癌SGC-7901细胞分成5组:（1）空白对照组;（2）Cur（10μmol·L-1）组;（3）Cur（20μmol·L-1）组;（4）Cur（40μmol·L-1）组;（5）DMSO（0.1%）;除空白对照组外,其余每组加入相应浓度的Cur并处理细胞12h、24h、48h,采用噻唑蓝比色分析法（MTT）检测Cur对胃癌SGC-7901细胞的增殖能力;二、将体外培养人胃癌SGC-7901细胞分成4组:（1）空白对照组;（2）Cur(10μmol·L-1)组;（3）Cur(20μmol·L-1)组;（4）Cur(40μmol·L-1)组;除空白对照组外,各组分别加入相对应的药物,共同孵育12h、24h。用划痕试验检测药物处理后细胞迁移能力的变化。三、将人胃癌SGC-7901细胞分成4组:（1）空白对照组;（2）Cur(10μmol·L-1)组;（3）Cur(20μmol·L-1)组;（4）Cur(40μmol·L-1)组;除空白对照组外,各组分别加入相对应的药物,共同孵育24h、48h。采用Annexin-V/Pl染色流式细胞术检测姜黄素处理细胞后细胞凋亡率。四、将人胃癌SGC-7901细胞分成4组:（1）空白对照组;（2）Cur(10μmol·L-1)组;（3）Cur(20μmol·L-1)组;（4）Cur(40μmol·L-1)组;除空白对照组外,各组分别加入相对应的药物,共同孵育24h、48h。采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）,检测GKN2、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的蛋白表达情况。五、将人胃癌SGC-7901细胞分成4组:（1）空白对照组;（2）Cur（10μmol·L-1）组;（3）Cur（20μmol·L-1）组;（4）Cur(40μmol·L-1)组;除空白对照组外,其余各组分别加入对应浓度的姜黄素,孵育24h。通过Western Blot法检测人胃癌SGC-7901细胞中Cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2的蛋白表达情况。结果:（1）MTT实验检测结果:选取姜黄素处理12h、24h、48h后的人胃癌SGC-7901细胞进行检测,Cur(10μmol·L-1)组;Cur(20μmol·L-1)组;Cur(40μmol·L-1)组均显示出增殖抑制作用,药物浓度越高、作用时间越长,对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用越强。（2）划痕试验检测显示:选取(10-40μmol·L-1)的姜黄素处理0h、12h、24h后的人胃癌SGC-7901细胞进行检测,测量其迁移距离的长度,Cur(10μmol·L-1)组;Cur(20μmol·L-1)组;Cur(40μmol·L-1)组均显示明显的迁移抑制作用,药物浓度越高、作用时间越长,对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用越强。（3）Annexin-V/Pl染色流式细胞术检测结果:选取(10-40μmol·L-1)姜黄素处理24h、48h的人胃癌SGC-7901细胞株,与空白对照组相比,均可诱导胃癌细胞凋亡。且高浓度组的凋亡率明显高于低浓度组;（4）Western Blot实验结果:选取药物处理24小时的人胃癌SGC-7901细胞株,与对照组相比,不同浓度的姜黄素(10、20、40μmol·L-1)处理的人胃癌SGC-7901细胞中Cleaved-caspase3、Bax的蛋白表达量均明显增加,Bcl-2的蛋白表达量均显著减少。（5）Western Blot实验结果:与空白对照组相比,随着浓度的升高,姜黄素处理的人胃癌SGC-7901细胞中GKN2的蛋白表达量明显增加;姜黄素处理的人胃癌SGC-7901细胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量较空白对照组明显降低。结论:姜黄素抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移和促进细胞凋亡可能是通过上调GKN2的蛋白表达和抑制JAK2/STAT3通路。