论文部分内容阅读
一、研究背景各种损伤特别是大面积烧伤导致皮肤缺损的治疗,是尽快封闭创面,由于自体皮源的不足,常导致治疗的失败。组织工程化皮肤研究一直是当前研究的热点,目前尚无特别有效的皮肤替代物应用于临床。而表皮干细胞(keratinocyte stem cell, KSC)具有强大的增殖能力,又可向各个阶段表皮细胞分化以维持皮肤新陈代谢,因此KSC作为皮肤重建的“种子细胞”成为研究的热点。如何在体外培养获得足够数量的KSC用于研究及移植,如何在体内外诱导KSC定向分化,对于组织工程皮肤具有重要意义。解决这些问题的关键在于研究KSC增殖与分化的调控机制。整合素β1是KSC未分化的分子标记之一,Jones等发现高表达整合素β1的表皮细胞具有更高的克隆形成能力,传代次数显著多于低表达的细胞[1]。。本室前期通过构建整合素β1小RNA干扰载体,转染KSC,发现下调表达整合素β1蛋白,实验组克隆形成率比对照组降低,促进KSC的分化[2]。提示整合素β1参与KSC的增殖分化的调控。目前虽然对整合素β1参与KSC增殖与分化的调控研究比较多,但是整合素β1的表达调控的机制尚不清楚。体外实验研究中,KSC通常从不同的个体分离和纯化,存在个体差异和不稳定性,因此寻找一种稳定细胞模型对KSC进行分化与增殖调控机制的研究具有重要意义。HaCaT是来源于正常成人上皮细胞的表皮细胞株,具有无限的增殖能力。研究表明,将HaCaT移植到裸鼠上,HaCaT可以形成分化上皮组织,表达特异性分化蛋白标志,因此HaCaT可以为研究人表皮细胞分化的调控提供一个非常理想的模型[3]。研究拟应用整合素β1启动子荧光素酶报告基因系统,以HaCaT细胞为模型,探讨表皮细胞中整合素β1对增殖分化的影响,以及整合素β1的表达调节机制,为进一步研究表皮干细胞的增殖分化机制奠定基础。二、研究目的1、下调人表皮细胞株HaCaT整合素β1,观察其增殖的情况。2、研究整合素β1启动子在HaCaT中的活性,为研究干细胞分化与增殖调控机制提供理论基础。