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小鼠卵母细胞相对较小,显微操作易导致胞质散裂,因此小鼠核移植难度较大,成功率较低,其中培养液、激活条件、去核方法都极大地影响其成功率。本研究通过对小鼠受精卵体外培养体系,MII期卵母细胞孤雌激活条件的筛选以及探讨MII期卵母细胞的去核方法为小鼠体细胞核移植的成功奠定基础。1、筛选最佳的小鼠胚胎体外发育培养体系,并进一步探讨不同浓度的FBS、PVA、hLIF对其体外发育的影响,从而为小鼠卵母细胞核移植后重构胚的体外培养提供支持。试验I:分别用自配的M16、mM16、KSOM、mKSOM、CZB进行体外发育培养,进而筛选出一种最佳的体外培养体系;在筛选出培养液的基础上进行试验II、III、IV,分别探讨FBS、PVA、hLIF对小鼠胚胎发育的影响。结果,试验I中,受精卵培养效果最好的培养液为mM16,其次为mKSOM,在这两种培养液中,胚胎发育到4-细胞的比率分别为94.7%(91/96)和85.8.%(73/85),发育到桑椹胚/囊胚的比率分别为84%(80/96)和81.1%(69/85),均明显高于其他三种培养液(p<0.05);试验II,用5%FBS、10%FBS或15%FBS代替mM16中的BSA时,胚胎发育至桑椹胚或囊胚的比率明显下降,分别为32.6%、35.8%,与对照组(82.1%)差异显著(p<0.05);试验III,用0.05 mg/mL PVA、0.1 mg/mL PVA、0.5 mg/mL PVA或1 mg/mL PVA取代mM16中的BSA,胚胎不能发育到桑椹胚/囊胚,与对照组差异显著(p<0.05);试验IV,三种不同浓度的hLIF均能提高胚胎在体外的发育率,但以1000 IU/mL浓度的hLIF效果最好。表明在不添加其他成分前提下,只在M16中添加0.1 mmol/L EDTA、0.5 mmol/L牛磺酸、1000 IU/mL hLIF便可获得84%的囊胚率;FBS和PVA不能有效取代mM16中的BSA。2、采用不同的激活方法对小鼠卵母细胞进行孤雌激活研究。小鼠注射hCG13 h后,采集卵母细胞并在体外培养4 h～5 h,分别采用乙醇、氯化锶、电脉冲对卵母细胞进行孤雌激活。结果显示:乙醇对小鼠卵母细胞的孤雌激活效果最好,其次是氯化锶,电脉冲对小鼠卵母细胞的孤雌激活效果较差;8%的乙醇激活5 min,其激活率可达97.9%,随后激活卵发育到桑椹胚/囊胚的比率为85.4%,与其他乙醇激活组差异显著;在氯化锶的激活组中,用2 mmol/L SrCl2和5μg/mL CB处理卵母细胞1 h,其激活效果最好;含有1%DMSO的氯化锶激活组中,卵母细胞的激活率普遍高于含5μg/mL CB的氯化锶激活组,差异显著(P<0.05),但随后激活卵发育到桑椹胚或囊胚的比率明显低于含5μg/mlL CB的氯化锶激活组,差异极显著(P<0.01);电脉冲对小鼠卵母细胞激活率和随后激活卵的发育率普遍都较低,其中以场强为2.0 kv/cm,持续时间160μs,连续两次激活效果