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目的：以IGFBP-3、IGFBP-5作为影响羊毛性状的两个候选基因,在分子克隆基础上,分别进行多态性检测以及不同基因型与部分羊毛性状的相关性分析,以期筛选出有育种指导价值的优势基因型。
方法：1.通过RT-PCR、RACE等技术,克隆获得两个候选基因的cDNA序列；2.通过RT-PCR分析IGFBP-3基因在绵羊不同组织的表达情况；3.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP等技术分析绵羊IGFBP-3和IGFBP-5基因的分子变异,并通过多重比较分析不同基因型对中国美利奴羊部分羊毛性状的影响。
结果：1.获得绵羊IGFBP-3全长cDNA序列2461bp(GenBank accession No:EU616622),含有一个882bp的完整开放阅读框架,以及136bp的5UTR区和1426bp的3UTR区,在3UTR区含有一个AATAAA多聚信号元件和一个启动mRNA降解的ATTTA序列元件。绵羊IGFBP-3基因组序列9125bp,包括了全部cDNA序列和693bp的3侧翼区序列,由4个编码蛋白质的外显子和一个包含3UTR区的第五外显子组成。这五个外显子被4个大小分别为2948、477、991和1573bp的内含子所隔开。所有外显子和内含子的连接区都符合保守的RNA剪接方式,即都遵循GT-AG法则；2.RT-PCR表明IGFBP-3基因在绵羊的心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤、大肠和小肠等组织中均呈高表达；3.获得了绵羊IGFBP-5 cDNA的中间核心序列1681bp(GenBank accession No:EU649694),包括一个816bp的完整开放阅读框架,以及774bp的5UTR区和91bp的3UTR区；4.在IGFBP-3中检测到五个SNP。不同位点的基因型和等位基因频率在不同绵羊品种的分布都具有一定的特异性。多重比较结果表明,不同位点对中国美利奴羊毛性状的影响表现出不同的作用,结合人与鼠毛囊分子生物学的研究,可以将IGFBP-3基因看成是影响羊毛性状的一个候选基因；5.采用PCR-SSCP技术在IGFBP-5中检测到1个SNP,该突变位外显子1处,但未引起氨基酸的变化。与中国美利奴羊部分羊毛性状的相关性分析表明,不同基因型与初生重、剪毛后体重、剪毛量和羊毛伸直长度存在一定相关性。结合人、鼠以及绒山羊毛囊分子生物学方面的研究,可以将IGFBP-5基因看成是影响羊毛性状的候选基因。
结论：1.获得了绵羊IGFBP-3全长cDNA及基因组序列,IGFBP-5的cDNA及部分基因组序列；2.IGFBP-3在绵羊心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤、大肠和小肠等组织中均呈高表达；3.多态性分析表明,IGFBP-3,-5不同位点的变异在所研究的绵羊品种中,其基因型频率和等位基因的频率存在一定的差异,表现出一定的品种特异性；Hardy-Weinberg平衡检验表明,不同位点上不同品种表现出不同状态；4.多重比较结果表明,IGFBP-3和IGFBP-5对羊毛生产性能有一定的影响,可以认为是影响羊毛性状的两个候选基因。