口虾蛄(Oratosquilla oratoria)眼柄内分泌调控机能的初步研究

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口虾蛄(Oratosquilla oratoria)是我国沿海重要的经济甲壳类之一,分布海域包括俄罗斯、日本、韩国、我国、越南以及澳大利亚沿海;因肉嫩味美,营养丰富,在许多国家和地区都是重要的渔业资源。我国口虾蛄资源随着捕捞过度、环境恶化等影响,出现严重衰退,市场价格亦日益攀升。因此,保护现有资源以及开发人工养殖技术极为重要。充分了解其繁殖生物学特征,是实现人工增养殖的重要基础。眼柄X器官-窦腺复合体通过分泌性腺抑制激素(gonad-inhibiting hormone,GIH)、高血糖激素(crustacean hyperglycaemic hormone,CHH)和蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)等神经肽类物质参与调节甲壳动物生长、发育、蜕皮、代谢等生理生化活动。本研究以口虾蛄为研究对象,采用常规组织学方法和电镜技术对其眼柄X器官-窦腺复合体结构进行了观察;对雌性口虾蛄进行单侧眼柄切除试验,查明眼柄切除后肝胰脏、卵巢、肌肉中主要营养成份以及卵黄蛋白原的变化规律;采用RNA-Seq技术构建精巢、卵巢、促雄腺、雌虾眼柄和雄虾眼柄基因表达图谱,并比较了雌虾和雄虾眼柄的差异表达基因和分离了大量与繁殖相关的候选基因。主要研究结果如下:1.组织学和电镜研究结果表明:口虾蛄的眼柄分为视皮层、外髓、内髓和端髓。外髓所占的体积最大,端髓其次,内髓所占体积最小。窦腺位于内髓和端髓之间,靠近内髓的位置,由窦腺壁和中央血腔组成。X器官位于外髓,内髓还有端髓的表面,都由较为分散的神经分泌细胞组成。通过观察窦腺的超显微结构,我们根据神经分泌细胞的大小、分布数量在口虾蛄窦腺中区分出4种神经内分泌细胞末梢。2.对雌性口虾蛄进行眼柄切除试验结果表明:单侧眼柄切除后,试验组口虾蛄性腺指数呈上升趋势,在切除后第5、10、15天显著高于对照组(P<0.05)。试验组和对照组口虾蛄的肝胰腺指数在试验后期均显著下降(P<0.05)。试验组卵巢中的糖原含量高于对照组,在第5、15天分别与对照组间具有显著差异(P<0.05);肝胰脏中的糖原含量也显著高于对照组(P<0.05);而肌肉中的糖原含量却从第5天开始下降,早于对照组。单侧眼柄切除后,试验组肝胰脏中蛋白质含量于第10天开始显著上升(P<0.05)。试验组卵巢中蛋白质含量也高于对照组,且在第15天试验组卵巢中蛋白质含量显著高于对照组;而试验组与对照组肌肉中的蛋白含量均表现出先上升后下降的趋势,但两组之间差异不显著(P>0.05)。试验组口虾蛄肝胰脏Vtg表达量在前10天逐渐上升,随后下降至15天,后又成缓慢上升趋势。试验组口虾蛄卵巢中Vtg表达量于第5天开始显著上升(P<0.05),在第10天逐渐下降。对照组口虾蛄卵巢中Vtg表达量在10天开始缓慢上升,且在10、15天显著高于试验组(P<0.05)。3.眼柄转录组学分析结果表明:测序共获得了51,427,400个clean data,其中雌性眼柄26,360,940个clean data,雄性眼柄25,066,460个clean data。组装后得到25,316个Unigenes。通过比较雌性和雄性眼柄基因表达水平,得到了差异表达基因有865个,其中588在雌性眼柄中高表达,277在雄性眼柄中高表达。在这些表达基因中,有代表性的雄性高表达基因有CHH家族、C型凝集素,雌性眼柄高表达的有热休克蛋白、铁蛋白、细胞色素P450等。本研究的结果将为我们今后研究口虾蛄眼柄的内分泌调控机制提供线索。
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